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北京东胜创新科技有限公司 联系方式 * 东胜创新 东胜创新 实时荧光定量PCR仪技术简介 聂尚海 博士 定量PCR仪组成概述 光源 光学元件 反应管 光学元件 热循环仪 1、热循环仪（PCR仪） 2、检测系统 3、总结 定量PCR原理及Opticon 热循环技术之 PCR仪组成 加热 制冷 控温 热循环技术之 加热 电阻丝加热 半导体/电阻丝加热 热循环技术之 电阻丝加热 样品模块 电阻丝 风扇 毛细管 风扇 电阻丝 热循环技术之 电阻丝/半导体加热 样品模块 Peltier 模块 散热槽 风扇 电阻丝 优点： 升温快速 准确 热循环技术之 制冷 风扇制冷 压缩机制冷 半导体制冷 热循环技术之 风扇制泠 毛细管 风扇 电阻丝 优势 价格低 劣势 精确性和均一性差 不能主动致冷 控温不能低于室温 热循环技术之 压缩机制冷 聚乙烯醇管 压缩机 样品模块 电阻丝 优势 制冷快 精确性尚可接受 劣势 体积大 控温易过头 (制冷时尤为如此) 违反蒙特利尔公约 (破坏臭氧层) 最大可过头 3°- 8°C Data collected by CYCLERtest BV 热循环技术之 制冷过头 热循环技术之 半导体制冷 优势 体积小 控温性能出色 可低于室温 可主动致冷 劣势 技术要求高 样品模块 Peltier 模块 散热槽 风扇 电阻丝 Opticon仪器组成 Opticon的PCR仪之 结构 Opticon的PCR仪结构： 三传感器和双区域 温度控制技术 具有动态温度梯度 Opticon的PCR仪之 寿命长 Last nearly twice as long as the nearest competitor Slope change in resistance is nearly three times better Opticon的PCR仪之 小结 先进的加热技术---电阻丝/半导体加热 先进的致冷技术---半导体制冷 控温技术---三点探测，双区域控制 控温快速、准确 精确性、均一性能良好 有温度梯度 寿命长 检测技术之 原理概述 光源 光学元件 反应管 光学元件 热循环仪 检测技术之 原理概述 光源 荧光染料 检测系统 检测技术之 光源 三种类型 钨灯 氩离子激光 发光二极管 (LED) 检测技术之 光源——钨灯 优势 常用 发出全光谱的光 价格适中 易更换 劣势 预热耗时 寿命短 需滤光片 产热 检测技术之 光源——氩离子激光 优势 亮度高 可发出单或双波长的光 聚焦好 劣势 需要移动扫描 价格昂贵 产热 寿命短 耗电 检测技术之 光源——发光二极管 优势 价格便宜 寿命长稳定 可输出不同颜色的光 体积小 产热少 劣势 需要滤光片 更换困难 亮度低 最高性价比！ 检测技术之 荧光染料 工作原理 染料吸收光能跃迁至高能级. 染料以荧光形式释放能量以回到基态，发出荧光. 发射光和激发光的波长不同. 常用的染料:FAM, SYBR Green，Pico Green 等多种染料 检测技术之 检测系统 三种类型 Charged Coupled Device (CCD) 光电二极管 光电倍增管 (PMT) 检测技术之 检测系统——CCD 优势 灵敏 可检测一定范围的光谱 体积小 稳定 劣势 检测范围窄 对强光和弱光 分辨率低 背景高 检测技术之 检测系统——半导体二极管 优势 体积小 价格便宜 耐用 劣势 灵敏度低 一次只能扫描一个样品 半导体二极管通过吸收光子产生电流 检测技术之 检测系统——PMT 优势 超灵敏:可检测到单个光子 检测范围广 劣势 体积大 一次只能读一个样品 通过把光能转化成电子能使信号得到扩增，所以PMT检测非常灵敏 检测技术之 Opticon检测系统 最高性价比的光源---LED 最灵敏、最实用的检测技术---PMT 超灵敏、检测范围最广 VVVVVVVVVVVV 扫描的时机、频率、次数、间隔、时间等都可控制 每2秒钟扫描一遍，96个发光管依发光 无机械部分 Opticon 实时荧光定量PCR仪之 检测系统 确定初始模板的浓度 Opticon 实时荧光定量PCR仪之 分析方法-标准曲线 * 东胜创新