双分子荧光互补系统分析S.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2014, 36(8): 1060– 1067 DOI: 10.11844/cj cb.2014.08.0062 双分子荧光互补系统分析S-periaxin蛋白的聚合 任页玫 石亚伟* (化学生物学与分子工程教育部重点实验室, 山西大学生物技术研究所, 太原030006) 摘要 S-periaxin蛋白是施旺氏细胞特异性表达的一种蛋白, 在维持髓鞘的稳定方面发挥重 Periaxin 要作用, 该蛋白基因的突变引起腓骨肌萎缩症4F亚型的发生。 基因由于mRNA剪切方式的 不同可以编码两种长短不同的含PDZ结构域的蛋白, 即L-periaxin和S-periaxin 。两种蛋白在施旺氏 细胞的定位存在明显的差异, 相对L-periaxin 而言, S-periaxin无论是分子结构还是生物学功能均未 S-periaxin 见相关研究。该文从大鼠的施旺氏细胞系RSC96克隆了 基因, 构建了原核表达载体pET- M-3C-S-periaxin, 在大肠杆菌中进行重组表达, 经Ni-NTA亲和柱和Sephacryl S-200凝胶层析柱获得 电泳纯的目的蛋白。体外戊二醛交联分析蛋白的聚合状态表明, S-periaxin蛋白在体外易于形成不 同聚合度的聚合物。免疫共沉淀也表明, S-periaxin蛋白存在同源蛋白间相互作用。另外, 构建了原、 真核双分子荧光互补系统, 并利用该系统分析了细胞内S-periaxin蛋白间的相互作用。 关键词 periaxin; 施旺氏细胞; 戊二醛交联; 免疫共沉淀; 双分子荧光互补 Analysis of Protein Interaction Between S-periaxin by Bimolecular Fluorescence Complementation Assay Ren Yemei, Shi Yawei* (Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering, Ministry of Education, China ; Institute of Biotechnology, Shanxi University, Taiyuan 030006, China) Abstract Periaxin is expressed by myelinating Schwann cells and plays an essential role in stabilizing the Schwann cell-axon unit in the myelinated fibers of the vertebra. Mutations in the periaxin gene are known to cause autosomal recessive demyelinating Charcot-Marie-Tooth (CMT4F). Periaxin gene encodes L-periaxin and a trun- cated isoform, S-periaxin, which have an N-terminal PDZ domain and are targeted differently in the Schwann cell. The molecul