结核菌培养方法、.pptVIP

表1 30例耐药情况分析 科研三要素 处理因素：抗结核药物的浓度 研究对象：肺结核病人 效益指标：DPC是一种独立的抗结核的药物，DPC有一定的实用价值 研究对象 诊断标准：痰菌培养呈阳性 纳入标准：痰菌培养呈阳性且未患有并发症，并对本次试验无影响 排除标准：不能有并发症；未接受相关治疗；不能有其它生理或病理状况（月经周期） 样本含量：30例 偏倚的控制 1，严格遵守随机化原则抽样，尽可能提高抽样对象的受检率。 2，用精良仪器并事先做好校正。 3，训练调查员并对其进行监督和质量控制，严格按设计要求进行调查。 科研设计方法 * * 结核菌培养方法、耐药性及存活时间的研究 抗结核药物的使用，在结核病防治上起了划时代的作用。50年代采用INH+PAS联合治疗，取得了较好疗效。但PAS服用量大，消化道反应多，病人不能耐受，90%不能完成治疗程。瑞士Geistlich药厂研制的Dipasic（简称DPC）（德国又名GEWO399），是以特殊方法，将INH与PAS合成的化合物。它能代替INH+PAS联合用药，增加疗效，副作用明显比PAS为少，德国Freudenthal等50余位专家均有Dipasic临床应用的报告，认为有效。但无Dipasic耐药性的报道。 当前，我国耐药性病人不断增加，寻求合理用药，是当务之急，为此我们对Dipasic作耐性研究，目的在于， （1）了解Dipasic对耐药菌株是否有效？ （2）Dipasic的药物抑菌浓度如何？以便研究用量与用法，提高临床疗效。 1、研究方法：从安徽医科大学附属医院的门诊及病房肺结核病人的痰进行结核菌培养，无论病人是初治抑复治，亦不分男女老少，凡痰菌培养阳性者，即作为研究对象。结核菌的检验，按标准常规操作进行。药敏培养基的制备：液体鸡蛋培养基内，按比例加入抗结核药物，其浓度按我国药敏标准，如INH、PAS、TB1，每毫升分别为1μg及10μg，SM、KM、CPM分别为10μg，RFP及RFD分别为50μg及250μg，EMB为5μg及50μg。 Dipasic则暂定为每毫升含药0.1μg、0.5μg、1.0μg及10μg四种。加入药物后，充分摇匀混合后，分装在中试管内，每管5毫升，摆成斜面，进行85℃—90℃一小时凝固灭菌，24小时后再灭菌一次，制成的含药培养基，保存在冰箱，一个月内有效。菌液制备：取培养基上生长一个月内的菌落，于磨菌器内灭菌生理盐水研磨呈均匀的菌液，再加灭菌盐水稀释，与标准管比较（制成每毫升含1毫升的菌液），最后100倍稀释成每毫升含10-2毫克菌液备用。 菌液接种：将含不同浓度的含药培养基顺序排列，并有不含药物的培养基作为对照。取每毫升含10-2毫克的菌液，每管接种0.1毫升，接种菌量为10-3毫克的菌液。放在37℃温箱内培养，每周观察一次，四周报告结果。报告的标准是，如培养基上无菌生长者为（一），培养基上有菌落数在50个以下者为（+），培养基上菌落数50个以上，但无融合者为（++），培养基上菌落大部分融合者为（+++）。 2、研究结果：我们研究的10种抗结核药物耐药性试验，这10种抗结核药物是：INH、PAS、DPC、TB1、EMB、RFP、RFD、SM、KM及CPM，围绕本文目的，我们仅取30例病人的其中INH、PAS及DPC三种药物的耐药性进行分析，其他另行报道。INH、PAS的浓度，按国家耐药性标准，分为1μg及10μg，以每毫升1μg为耐药上界，1μg药浓下不能生长者为阴性，为敏感菌。1μg生长者为阳性，为耐药菌。 DPC的浓度，由于我们尚需寻求合适的抑菌浓度，故分为每毫升含药0.1μg、0.5μg、1.0μg及10μg四种不同的浓度。为便于统计比较，暂以1μg作为耐药标准，1μg以下者为敏感，1μg以上者为耐药。　 　 　 10(33.4) 20(66.6)　 DPC（%） 8(26.7) 22(73.3) PAS（%） 27(90.0) 3（10.0） INH（%） 耐药 敏感 药物名 从表1可见耐INH菌珠已达90%,耐DPC菌株为33.4%,经统计学处理,X2=27.44,P＜0.001,有高度显著性。PAS与DPC比较，经统计学处理，校正卡方为0.062，P＞0.05,无显著性。　 1(3.3%) 6(20.0%) 3(10.0%) 20(66.6%) DPC(%) 3(10.0%) 3(10.0%) 2(6.6%) 22(73.4%) PAS(%) 22(73.4%) 4(13.3%) 1(3.3%) 3(10.0%) INH(%) +++ ++ + - 药物名 表2 敏感与耐药程度的分析　 表1