榛子产紫杉醇内生真菌Penicilliumaurantiogriseum中.pdf

ｈｔｔｐ:/ / ｊｏｕｒｎａｌ.ｇｘｚｗ.ｇｘｉｂ.ｃｎ － 　 Ｇｕｉｈａｉａ　 Ａｐｒ. ２０１６ꎬ３６(４):４５６ ４６１ － ｈｔｔｐ:/ / ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍ ＤＯＩ:１０.１１９３１/ ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１４１００１１ 刘洪伟ꎬ杨艳芳ꎬ李艳艳ꎬ等. 榛子产紫杉醇内生真菌Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｍ 中ＧＧＰＰ合酶基因的克隆与表达[Ｊ]. 广西植物ꎬ２０１６ꎬ３６(４): － ４５６ ４６１ ＬＩＵＨＷꎬＹＡＮＧＹＦꎬＬＩＹＹꎬｅｔａｌ.ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＧＧＰＰ ｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍｔｈｅｐａｃｌｉｔａｘｅｌ￣ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｕｓ (Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍａｕｒａｎ￣ － ｔｉｏｇｒｉｓｅｕｍ) ｉｎ Ｃｏｒｙｌｕｓ ａｖｅｌｌａｎａ[Ｊ]. Ｇｕｉｈａｉａꎬ２０１６ꎬ３６(４):４５６ ４６１ 榛子产紫杉醇内生真菌Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｍ 中ＧＧＰＰ合酶基因的克隆与表达 刘洪伟ꎬ杨艳芳ꎬ李艳艳ꎬ王　 帅ꎬ邱德有∗ (林木遗传育种国家重点实验室ꎬ中国林业科学研究院林业研究所ꎬ北京 １０００９１ ) 摘　 要:牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶是产紫杉醇内生真菌紫杉醇合成下游途径中的关键步骤之一ꎬ在榛子 － 产紫杉醇内生真菌中进行紫杉醇生物合成研究时首先要确认 ＧＧＰＰ合酶的存在ꎮ 该研究通过ＲＴ ＰＣＲ方法 克隆得到了榛子产紫杉醇内生真菌Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｍ 中ＧＧＰＰ 合酶基因ＰａＧＧＰＰＳ (ＧｅｎＢａｎｋ登录号 为ＫＭ８８１４３０)的ｃＤＮＡ 开放阅读框 (Ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅꎬＯＲＦ)ꎮ 利用生物信息学方法ꎬ我们分析了该基因的 序列ꎬ并对其编码的氨基酸序列进行了预测ꎮ 结果发现该基因ＯＲＦ长度为１１１３ ｂｐꎬ预计蛋白分子量为４０.９８ ｋＤꎬ等电点为６.１６８ꎬ表明该蛋白呈酸性ꎮ 对其进行亲疏水性分析发现肽链整体呈现为亲水性ꎮ ＰａＧＧＰＰＳ 的 － 主要二级结构元件为α 螺旋ꎬ并且包含一个异戊二烯类化合物合酶功能域ꎮ 对榛子产紫杉醇内生真菌与其 他物种的ＧＧＰＰＳ进行氨基酸同源性分析ꎬ发现其与娄地青霉、曲霉菌和费氏新萨托菌的一致性较高ꎬ分别为 ９４％、７６％和７６％ꎮ 进化树分析表明来自动物、真菌和酵母的ＧＧＰＰＳ聚为一类ꎬ来自植物的ＧＧＰＰＳ聚为一类ꎬ 其中榛子产紫杉醇内生真菌的ＧＧＰＰＳ和青霉菌的进化关系最近ꎬ与植物的ＧＧＰＰＳ 的进化关系最远ꎮ 对其进 行基础生物信息学分析后ꎬ我们构建了原核表达载体ꎬ成功诱导其表达并得到可溶性蛋白ꎮ 该研究结果为下 一步深入研究ＧＧＰＰＳ基因在内生真菌Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｍ紫杉醇合成途径中的作用及和构建高产紫杉 醇基因工程菌株奠定了一定的基础ꎮ 关键词:内生真菌ꎬＧＧＰＰ合酶ꎬ原核表达ꎬ基因克隆ꎬ紫杉醇 中图分类号:Ｑ９４３.２　 　 文献标识码:Ａ　 　 文章编号:１０００￣３１４２(２０１６)０４￣０４５６￣０６ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＧＧＰＰ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ￣ｐｒｏｄｕｃ