拟衰老耳聋模型的建立跟利水药对模型动物听功能的影响文档.docVIP

拟衰老耳聋模型的建立及利水药对模型动物听功能的影响 赵丽楠 曹筱筱 张丹丹 茹魏哲 杨意 闻徐剑 指导老师：王静 上海中医药大学2005级中西医结合七年制、2006级中西医结合，201203 [摘要] 目的：探讨拟衰老耳聋动物模型的建立方法，并在此基础上研究利水中药泽泻对于模型动物听功能的影响。方法：选用耳廓声反射良好的白色豚鼠，通过腹腔单独注射D-半乳糖或联用庆大霉素试建立衰老耳聋模型，中药干预组采用泽泻水煎液进行灌胃治疗。实验以过氧化氢酶（CAT）活力作为衰老检测指标，以听性脑干反应（ABR）检测豚鼠听阈的变化。结果：与正常对照组相比，D-半乳糖注射组动物听阈在2K-12K频率范围内均明显下降，但D-半乳糖与GM联用动物听阈较正常对照组无显著性差异，利水药干预组动物与相应D-半乳糖与庆大霉素联用组动物相比，听阈有降低趋势，但无统计学意义。结论：D-半乳糖单独用药即能造成老年性耳聋模型，D-半乳糖与庆大霉素联用模型动物听力下降不明显，提示二者联用可能存在拮抗效应；利水药对D-半乳糖与GM联用模型动物显示一定的治疗作用。 [关键词] 拟衰老；耳聋；泽泻；D－半乳糖；庆大霉素 老年聋是因年龄增长、听觉器官及身体其他不同组织与器官共同发生的缓慢进行性老化过程，并出现听力减退的生理现象，随着社会人口老龄化的加剧，老年聋的发病率也居高不下[1]，研究老年聋具有重要的意义。 老年动物模型的建立方法有：臭氧损伤法、D-半乳糖法、胸腺摘除法、快速老化模型等，其中D-半乳糖法操作简单，所需经费少，见效明显，与自然衰老相似，为国内常用的衰老模型造模方法。有文献报道[2]，D-半乳糖可以诱导大鼠内耳拟老化模型，该模型对卡那霉素耳毒性的易感性增强，本研究在此基础上加以修改，采用D-半乳糖单独使用或与庆大霉素（GM）联用建立拟衰老耳聋模型，从而探索可行的老年聋建模方法。 中医理论认为，肾开窍于耳，耳为肾之官，肾又为先天之本，主水液代谢。中医多定义老年性耳聋为年老渐致肾虚引起，所以在治疗耳鸣耳聋一证时好投调肾壮肾之品。我们发现，中医从肾论治耳聋的常用方剂如六味地黄汤，耳聋左慈丸，五苓散等，配伍时均选用了泽泻这味利水药。研究发现，泽泻具有利水渗湿作用，能够缓慢穿透内耳，在血-外淋巴及外淋巴-内淋巴之间形成渗透梯度，可促使内淋巴外排，降低内淋巴积水，从而降低内淋巴有害代谢物浓度。因此本研究选用中药常用利水药泽泻，在D-半乳糖以及庆大霉素造成的衰老耳聋动物模型上，观察利水药对模型动物听功能的影响。 1.材料与方法： 1.1.材料 1.1.1实验动物 1月龄白色驯化豚鼠110只，250－300g，清洁级，耳廓声反射良好。由上海中医药大学动物房提供 1.1.2药物和试剂 D-半乳糖（D-gal），25g/瓶，国药集团化学试剂有限公司，批号： 硫酸庆大霉素（Gentamicin，GM）注射液，8万单位/2ml，开封制药（集团）有限公司，批号 中药泽泻，购于上海中医药大学附属曙光医院。 试剂盒：过氧化氢酶（CAT）试剂盒，南京建成生物工程公司，批号 1%戊巴比妥钠，由上海中医药大学教学实验中心提供。 1.1.3仪器和设备 Neuropack 2型诱发电位仪（日本光电公司） 80-1离心机 电热恒温水浴锅 紫外分光光度计 其它仪器：电子秤；天平；手术器械等。 1.2.方法 2.2.1药物制备 泽泻的用量参照经典方耳聋左慈丸确定用量，60kg成人标准用量为9g。豚鼠按成人用量的20倍灌胃给药，即用量3g/kg。 称取中药泽泻，10倍量双蒸水浸泡2h，武火煮沸后，文火煎煮30min，取药液。再加入8倍量双蒸水浸泡2h，武火煮沸后，文火煎煮30min，取药液。将两次药液合并，纱布过滤，制得中药水煎液。中药水煎液再浓缩至含生药量1.0g/ml。 2.2.2动物分组及用药 将豚鼠按体重随机分为6组： 正常对照组（N组） 10只 半乳糖衰老模型组（D组） 20只 半乳糖+GM低剂量组（DGL组） 20只 半乳糖+GM高剂量组（DGH组） 20只 半乳糖+GM低剂量+泽泻治疗组（ZXL组） 20只 半乳糖+GM高剂量+泽泻治疗组（ZXH组） 20只 除正常对照组外，其它各组用D－半乳糖配置的注射用液以150mg/kg每日腹腔注射，连续51d，建立拟衰老动物，正常对照组每日腹腔注射等量生理盐水。 D－半乳糖用药后期20d（32d-51d），对DGL组、ZXL组每日腹腔注射GM 40 mg/kg，对DGH组、ZXH组每日腹腔注射GM 80mg/kg，建立耳聋模型。 中药泽泻治疗组ZXL组和Z