微小核糖核酸.pdfVIP

中国循环杂志 2017 年 2 月 第 32 卷 第 2 期（总第 224 期）Chinese Circulation Journal，February，2017，Vol. 32 No.2（Serial No.224） 177 基础与实验研究 微小核糖核酸 -31 对大肿瘤抑制因子 2 及心肌细胞肥大的调控作用 曾俊义，张婉，丁露，魏云峰，郑泽琪，文通，付勇南 摘要 目的：通过下调肥大心肌细胞中微小核糖核酸（miR）-31 的表达，观察 miR-31 对大肿瘤抑制因子 2（LATS2）及 心肌细胞肥大的调控作用。 方法：体外分离大鼠心肌细胞并连续培养 10 天，按干预条件不同将心肌细胞分为 4 组：空白对照组、单纯血管 紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ ）干预组、 miR-31 抑制物慢病毒感染组、阴性病毒感染组。培养第 8 天实时荧光定量逆转录聚合酶 链式反应（qRT-PCR）检测各组心肌细胞 miR-31、LATS2 及肥大基因心房钠尿肽（ANP）、β- 肌球蛋白重链（β-MHC） 表达。培养第 10 天心肌细胞荧光探针染色观察心肌细胞形态变化。蛋白免疫印迹（Western blot）检测 LATS2 蛋白表 达变化。双荧光素酶报告基因质粒转染 293T 细胞并检测荧光素酶活性，鉴定 miR-3l 对 LATS2 的靶向作用。 结果：与空白对照组相比，单纯 Ang Ⅱ干预组 miR-31、心肌肥大基因 ANP、β-MHC 表达水平均显著上升 （ P 0.05），心肌细胞相对表面积明显增大（P 0.05），而 LATS2 基因及蛋白表达明显下调（P 0.05）；与单纯 Ang Ⅱ干 预组比较，miR-31 抑制物慢病毒感染组 miR-31、心肌肥大基因 ANP、β-MHC 表达明显下调（P 0.05），心肌细胞 相对表面积减小（P 0.05），而 LATS2 在基因水平略有上升，蛋白水平则显著上调（P 0.05）。双荧光素酶报告基因 检测显示 TRAF6-3 UTR+miR-146b 相对荧光素酶活性较 TRAF6-3 UTR+miR-NC 显著性下降（P 0.01），LATS2-3 UTR+miR-31 相对荧光素酶活性较 LATS2-3 UTR-NC+miR-31 显著性降低（P 0.01）, 差异均有统计学意义。 结论：下调肥大心肌细胞 miR-31 表达水平可一定程度逆转心肌细胞肥大，miR-31 靶向作用 LATS2 参与调控心 肌细胞的肥大。 关键词 核糖核酸类；肿瘤抑制蛋白质类；肌细胞 , 心脏 Regulatory Effects of miRNA-31 on LATS2 and Cardiomyocyte Hypertrophy in Rat’s Cardiomyocyte in vitro ZENG Jun-yi, ZHANG Wan, DING Lu, WEI Yun-feng, ZHENG Ze-qi, WEN Tong, FU Yong-nan. Institute of Hypertension at Jiangxi Province, The First Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang (330006), Jiangxi, China Corresponding Author: WEI Yun-feng, Email: wyf5629@163.com Abstract Objective: To observe the regulatory effects of miRNA-31 (miR-31) on LATS2 and cardiomyocyte hypertrophy via down-regulating miR-31 expression in rat’s cardiomyocytes in vitro . Methods: Rat’s cardiomyocytes were isolated and cultured for 10 days in vitro , according to different intervention methods, the cells were divided