氯化锂阻滞DNA合成抑制前列腺癌生长-病理学与病理生理学专业毕业论文.docxVIP

温州医学院硕士学位论论文氯化锂阻滞DNA合成抑制前列腺癌生长 温州医学院硕士学位论论文 氯化锂阻滞DNA合成抑制前列腺癌生长 硕士研究生：侯传玲 硕士生导师：孙爱静教授 中文摘要 背景前列腺癌(prostate cancer,PCa)是欧美国家男性最常见的恶性肿瘤之一。 目前，随着生活习惯西方化、人口老龄化及诊断技术的提高，我国PCa发病率 逐年增高，影响着50岁以上男性的生活质量和预期寿命。许多晚期患者对雄激 素的剥夺疗法发生抵抗，导致治疗的失败，在疾病进展的2年内死亡。目前发生 去势抵抗的机制还没有明确。 GSK-3(glycogen synthase kinase-3)是一种ks／苏氨酸蛋白激酶，大量的实验 证实抑NGSK．3活性可以有效延缓晚期前列腺癌患者发生去势抵抗的进程。目前 GSK．3的有效抑制剂有30多种，LiCI是其中之一。 锂(Li)是一种人体非必须微量元素，其化合物形式LiCI为临床一线治疗 双相情感障碍药物。很久以前人们就发现锂可以减弱正常细胞或肿瘤细胞的增 殖，动物实验研究证实，LiCl可以降低癌的发生率。临床资料表明用锂治疗的精 神分裂症患者肿瘤进展的危险性明显低于未用锂的正常人群，肿瘤进展和锂的用 量呈显著的反向关系。有研究发现锂是GSK．3非ATP竞争性抑制剂。Erdal等的体 外研究显示LiCI通过抑制GSK．3／3的活性抑制肝细胞癌的生长。Liao等的研究提 示，GSK．3 B活性与前列腺癌进展相关，并报道了GSK．3／3的抑制能够增强肿瘤 坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)所介导的前列腺癌细胞凋亡。LiCI对前 列腺癌细胞生长影响的系统性研究少见报道。 目的研究氯化锂(LiCI)对前列腺癌生长的影响并探讨其作用机制。 方法选用激素非依赖性前列腺癌PC．3细胞株，采用细胞培养和BALB／c裸鼠裸鼠 背部皮下移植实验，检测Licl对PC．3细胞生长的影响。 1．细胞计数和生长曲线：培养的PC．3细胞台盼蓝染色判定细胞活性，计数活细胞 数，绘制时间及剂量曲线，计算细胞对数生长期倍增时间。同时进jTBALB／c裸 鼠裸鼠背部皮下移植，记录移植瘤的出现时间及生长状态，检钡ULiCl是否抑制 PC．3细胞生长。 2．MTT法检测细胞增殖活性：培养的PC．3细胞应用pre．assembled试剂盒(Sigma) 温州医学院硕士学位论论文施行MTT测定分析，具体步骤按试剂盒操作手册进行。观察LiCI对PC．3细胞增殖 温州医学院硕士学位论论文 施行MTT测定分析，具体步骤按试剂盒操作手册进行。观察LiCI对PC．3细胞增殖 活性的影响。 3．BrdU掺入分析：分别于细胞培养过程中和实验裸鼠处死前加入BrdU孵育进行 DNA复制细胞标记，计算阳性标记细胞百分比，检测LiCl对PC．3细胞DNA合成 的影响。 4．细胞周期分析：培养的PC．3细胞70％冷乙醇固定，0．01％RNase处理，PI染色后， 用Backman．Counter公司的EPICS XL．MCL型流式细胞仪检测。结合BrdU掺入分 析结果进一步探讨LiCl对PC．3细胞周期进程的影响。 5．Western blot分析：收集实验过程中不同处理方法、不同实验阶段的PC．3培养细 胞和移植瘤，RIPA裂解细胞，SDS．PAGE凝胶电泳。观察LiCI对PC．3细胞DNA复 制相关蛋白的变化的影响。 结果 1．LiCI抑制PC．3细胞生长 与对照组相比，细胞培养液中LiCI浓度达到10raM时，PC．3细胞的生长受 到明显抑制(P0．05)。在该浓度下，细胞对数生长期倍增时间也有21．5小时增 加到30．2小时。动物实验也表明LiCI处理组移植瘤的的体积和重量明显降低。 2．LiCI抑制PC．3细胞的增殖活性 MTT分析表明LiCI对PC．3细胞增殖活性呈剂量依赖性抑制。 3．LiCI诱导DNA合成阻滞，使S期细胞比例增加，扰乱细胞周期进程 BrdU掺入分析显示LiCI以剂量依赖性方式明显减少血清诱发的BrdU掺入 而进一步的流式细胞分析结果显示：与PBS对照组比较，随着LiCI作用时间的 延长，S期细胞百分比逐渐增加。 4．LiCI影响DNA复制相关蛋白的表达 Western blot结果显示LiCI处理组cdc6，cdc25C，cyclinA 2和E2蛋白水平下 调、CDK inhibitor p21c1P1蛋白水平上。 结论 1．LiCl抑SUPC．3前列腺癌生长，阻滞移植瘤的发生。 2．LiCI对PC．3细胞生长抑制现象可能与阻滞细胞DNA合成，导致细胞周期进程紊 乱有关。 3．LiCl弓l起PC．3细胞S期静止可能通过抑StJGSK一3p活性，下调cyclins A2，Cyclin E2，cdc6 and cdc 25C蛋白水平