棉铃虫N2乙酰2β2D2氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质.pdf

( ) 昆 虫 学 报 Acta Entomologica Sinica , August 2005 , 48 4 : 498 - 502 ISSN β 棉铃虫 N乙酰 D氨基葡萄糖苷酶的 分离纯化及酶学性质 1 2 1 2 1 黄小红 ,陈清西 ,尤民生 ,王 　君 ,关 　雄 ( 1. 福建农林大学动物科学学院 , 生物农药与化学生物学教育部重点实验室 ,福州 　350002 ; 2 . 厦门大学生命科学学院 , 教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室 , 福建厦门　361005) 摘要 : 以棉铃虫 Helicoverp a armigera 蛹为材料 ,通过硫酸铵沉淀分级分离 、Sephadex G200 分子筛柱层析和 DEAE32 离子交换柱 β 层析纯化 ,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N乙酰 D氨基葡萄糖苷酶酶制剂 。纯酶的比活力为 2 67879 Umg 。以对硝基苯 β ( β ) N乙酰 D氨基葡萄糖苷 pNP DGlcNAc 为底物 ,研究酶催化底物水解的反应动力学 。结果表明:酶的最适 p H 为 563 ,最 适温度为 55 ℃。该酶在 p H 4～8 区域较稳定 ,而在 p H 8 时能迅速失去活力 ;在 50 ℃以下处理 30 min ,酶活力仍保持稳定 ,高 于 50 ℃,酶很快失去活力 。酶促反应动力学符合米 氏双 曲线方程 ,测得米 氏常数 K 为 016 mmolL ,最大反应速度 V 为 m m μ - 1 - 1 β 1073 mol ·L ·min 。酶催化 pNP DGlcNAc 反应的活化能为 6624 kJ mol 。 β 关键词 : 棉铃虫 ; N乙酰 D氨基葡萄糖苷酶 ; 分离纯化 ; 动力学 ; 稳定性 ( ) 中图分类号 : Q965 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 2005 β Isolation , purif ication and partial characterization of the NacetylD glucosa minidase from the pupae of Helicoverpa armiger a HUAN G XiaoHong1 , CHEN QingXi2 , YOU MinSheng1 , WAN G Jun2 , GUAN Xiong1 ( 1 Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology , Ministry of Education , College of Animal Science , Fuj ian Agriculture and Forestry University ,