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微生物细菌分离培养实验报告 　　重庆大学研究生专业实验教学　　实验报告书　　实验课程名称：　　实验指导教师：　　学院：专业及类别：学号：姓名：实验日期：成绩：　　重庆大学研究生院制　　一、实验目的　　1、了解分离与纯化微生物的基本原理及方法；　　2、了解倒平板配制土豆培养基的方法与平板划线分离的基本操作技术；；　　3、学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能；　　4、初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。　　二、实验原理　　1、培养基的种类培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。培养基的种类很多，根据培养成分的不同可分为天然培养基、合成培养基与半合成培养基；根据物理状态的不同又可分为液体培养基和固体培养基。微生物的分离、纯化、记数等方面的研究常常使用的就是固体培养基。本实验就是使用的固体培养基。　　已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。　　培养基的原材料来源十分广泛，本实验采用的原材料为土豆。　　2、接种方法与无菌接种　　将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。接种的关键是要严格的进行无菌操作。微生物的接种方法很多，划线接种、三点接种、穿刺接种、混浇接种与涂布接种是几种常用的接种方法。　　划线接种是最常用的接种方法，即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可以达到接种的目的。常用的接种工具为接种环、针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。　　三点接种是把少量的微生物接种在平板表面，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察研究它们的形态。研究霉菌形态时就常用此法。　　穿刺接种是用针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺。该法常用于厌氧菌种的保藏或微生物的动力研究。　　混浇接种是先将待接的微生物放入培养皿中再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就被稀释了。待平板凝固后，置于适宜温度下培养，就可以长出单个菌落的微生物。　　涂布接种是将菌液倒入平板上，再用涂布棒在表面迅速的作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可以长出单个菌落的微生物。　　本实验采用的是划线接种。为了防止接种时引入其它微生物，整个操作过程均需在无菌操作台上进行，还需对操作员的双手进行酒精消毒，每次划线前都需灼烧接种环，接种时才打开培养皿且不能全部打开，接种完马上关上。　　三、实验器材　　1、仪器　　培养皿、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、酒精灯、玻璃棒、接种环、15ml离心管、试管架、镊子、电磁炉、锅、恒温培养箱、高温灭菌锅、无菌操作台、酒精灯、天平、滤纸等。　　2、材料　　土豆、琼脂、蒸馏水、酒精、土壤样品　　四、实验步骤　　1、土壤稀释液的配制　　①在菜地用九点取样法取适量土壤样品，具体操作为：在菜地选取九个取样点，在每个取样点取相同量的表层土壤，然后将其混合均匀；　　②称取1g土壤样品与99ml蒸馏水，将其配制成100ml的土壤溶液；　　③用移液管取9ml蒸馏水于15ml离心管中，再用移液枪取1ml前一步已配制的土壤溶液于离心管中，摇匀，即为10-3的土壤溶液；　　④重复前一步，将土壤溶液稀释为10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列稀释液。　　2、土豆培养基的制备　　①用天平称取200g土豆，清洗干净后去皮切丁；　　②用量筒量取1000ml蒸馏水与电磁炉锅中，再加入已准备好的土豆，将其煮烂；　　③从锅中取出已煮烂的土豆，用纱布过滤，滤液待用；　　④称取20g琼脂与滤液中，再用蒸馏水定容至1000ml；　　⑤在制备好的滤液中加入菌液，然后放入高温灭菌锅中，在121℃下灭菌20min；　　⑥取出已灭菌的土豆培养基，待其熔化后冷却至60℃，倒入每付平板约15-20ml，待其凝固后便可使用。　　3、微生物的接种与分离　　①将接种需要的所有器材均放置于无菌操作台上；　　②用浸泡在酒精里棉花给双手灭菌，点燃酒精灯，右手拿接种环，左手拿培养基；　　③将接种环放在火焰上烧灼，待其冷却后在10-6土壤稀释液中蘸取少量液体，打开培养基的一部分，采用划线接种，使之形成单菌落，一共划线3-4次，每划线一次就需在火焰上烧灼一次；　　④重复上步，接种10-7、10-8的土壤稀释液的微生物；　　⑤接种完的培养基放在恒温培养箱中倒置培养48h，取出观察。　　五、结果与思考　　1、