米根霉发酵产L乳酸的中和剂研究及代谢通量分析-食品科学专业毕业论文.docx

米根霉发酵产L．乳酸的中和剂研究及代谢通量分析 米根霉发酵产L．乳酸的中和剂研究及代谢通量分析 摘要 在米根霉发酵产L．乳酸过程中，一般采用CaC03作为酸中和剂，不仅L． 乳酸损失大，且环境污染严重。为降低L．乳酸生产成本，寻求替代CaC03的新 型中和剂，本文通过摇瓶发酵优化得出以CaC03、NaOH溶液和氨水作为中和 剂的最适培养基组成，通过罐发酵实验确定了CaC03、NaOH溶液和氨水的最 适中和剂浓度，并在最适浓度基础上考察了米根霉的菌体形态和发酵动力学， 实现了NaOH溶液和氨水作为中和剂的半连续发酵，同时对其进行代谢通量分 析。主要研究结论如下： 1．通过单因素和正交试验，优化得出采用CaC03、NaOH溶液和氨水作为 中和剂时的培养基组成：(1)以CaC03作为中和剂的最优培养基组成：葡萄糖 1209／L，(NH4)2S04 4．09／L，KH2P04 0．159／L，NaH2P04 0．209／L，ZnS04。7H20 O．229／L，MgS047H20 O．359／L。(2)以NaOH溶液作为中和剂的最优培养基组 成：葡萄糖1209／L，(NH4)2S04 4．09／L，MgS04。7H20 O．359／L，ZnS04‘7H20 O．229／L，’NaH2P04 0．109／L，KH2P04 0．159／L。(3)以氨水作为中和剂的最优培 养基组成：葡萄糖1209／L，(NH4)2S041．09／L，MgS04‘7H20 O．359／L，ZnS04·7H20 0．229／L，NaH2P04 0．159／L，KH2P04 O．159／L。 2．NaOH溶液和氨水作为中和剂时，添加Ca2+后L．乳酸产量平均提高7．3 倍；通过罐发酵得出米根霉发酵产L-乳酸的最适pH值为5．5士0．2，NaOH溶液、 氨水溶液作为中和剂的最佳浓度分别为10mol／L、25％，通过摇瓶发酵试验得出 CaC03最佳浓度为609／L；在最适NaOH溶液、氨水、CaC03浓度基础上进行 罐发酵得菌丝体小球直径分别为0．2．1．2mm、1．2．2．2mm、O．8．1．8ram，残糖分别 为2．589／L、1．379／L、22．78 g／L，L-乳酸产量分别为74．349／L、80．619／L、75．809／L， 发酵强度分别为1．039／(L．h)、1．129／(L．h)、1．409／(L．h)；而使用NaOH溶液和 CaC03复合中和剂、氨水和CaC03复合中和剂时发酵强度皆为1．18 g／(L．h)，高 于NaOH溶液、氨水的发酵强度，低于CaC03的发酵强度。 3．在米根霉半连续发酵过程中，使用NaOH溶液作为中和剂时，L．乳酸平 均发酵强度为1．53 g／(L．h)，以氨水作为中和剂时，L一乳酸平均发酵强度为1．65 g／(L．h1，高于分批发酵的产酸强度。 4．简单构建了米根霉As3．819胞内代谢网络模型。应用代谢通量分析法，分 别以10mol／LNaOH溶液、25％氨水、609／LCaC03作为中和剂时不同发酵阶段胞 内代谢通量分布的变化。以NaOH溶液为中和剂，第12h、36h、60h产物L．乳酸 的流量速率分别为0．93mmol／g／h、2．05mmol／g／h和5．83mmol／g／h：以氨水为中和 剂时，第12h、36h、60h产物L一乳酸的流量速率分别为1．48mmol／g／h、2．02 剂时，第12h、36h、60h产物L一乳酸的流量速率分别为1．48mmol／g／h、2．02 mmol／g／h、5．94mmol／g／h；以CaC03作为中和剂，第12、30h、48h产物L．乳酸的 流量速率分别是10．54mmol／g／h、4．72mmol／g／h、7．30mmol／g／h。 关键词：米根霉；L．乳酸：中和剂；半连续发酵；代谢通量分析 II Study Study on neutralizers of L—-lactic acid produced by Rhizopus oryzae and Metabolic Flux Analysis Abstract CaC03 was commonly used as an acid neutralizer in the process of producing L—lactic acid by Rhizopus oryzae．CaS04 residue from the recovery procedure not only caused the loss of L-lactic acid during filtration but also brought enormous environmental pressures．Therefore，in o