猕猴仿生性组织工程化周围神经移植物的实验研究-骨外科学专业毕业论文.docxVIP

硕卜硷文 硕卜硷文 猕猴仿生性组织工程化周围神经移植物的实验研究 江长青 把这种移植物用于修复低等哺乳类动物短距离缺损获得良 好的，证明这种方法在技术路线上是可行的。 因而本实验选择在高等哺乳动物猕猴体内构建这种神经 移植物修复长段神经缺损，国内外尚未见报道，在移植后五 个月评价它的疗效，为将来应用于临床创造条件。实验共分 成四大部分：(1)成年猕猴的雪旺细胞分离，培养，纯化和 鉴定。2)成年猕猴去细胞基底膜管的制各。(3)雪旺细胞 与去细胞神经桥接物在体外结合和培养。(4)同种异体去细 胞神经桥接物种植自体雪旺细胞后体内移植。 一． 成年猕猴的雪旺细胞分离，培养，纯化和鉴定。 以成年猕猴作为自体雪旺细胞来源，实验大致步骤：近端结扎成年猕 猴左或右腓总神经，1周后取结扎处下2—3 cm的神经，手术 显微镜下剔除神经结缔组织，充分剪碎，置入0．2％胶原酶消 化3 0分钟后加入0．2j％胰蛋白酶消化20分钟，再加入血清 中和胰蛋白酶，40 O目滤器过滤，离心，以1 x1 O 4／m1接种于 预涂多聚赖氨酸培养板中。4天后，加入含1 O—M浓度的 Ara—c的培养液培养两天换成正常的培养液，细胞长满板底 后，经S—l OO免疫组化染色，计算出阳性细胞百分比，表示 雪旺细胞的纯度。通过单核细胞直接细胞毒性测定(MTT) 法测试首次传代细胞的增殖能力以及通过分析每代雪旺细 胞的OD值来了