玉米赤霉烯酮降解酶在枯草芽孢杆菌中的表达及其对母.pdfVIP

动物营养学报２０１７，２９（１１）：４０１９⁃４０２５ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１７．１１．０２３ 玉米赤霉烯酮降解酶在枯草芽孢杆菌中的 表达及其对母猪繁殖性能的影响 １ １，２ １ ３ １∗ ２ 王相生 　 孙亚宁 　 阮崇美 　 张全伟 　 张　 勇 　 胡骁飞 （１．甘肃农业大学动物医学院，兰州 ７３００７０；２．河南省农业科学院，农业部动物免疫学重点实验室， 郑州 ４５０００２；３．甘肃农业大学生命科学技术学院，兰州 ７３００７０） 摘　 要： 本试验旨在建立玉米赤霉烯酮（ＺＥＮ）降解酶基因ＺＥＮ⁃ｊｊｍ 在枯草芽孢杆菌中的表达 体系，确定其产物的生物降解活性及对母猪繁殖性能的作用。 克隆ＺＥＮ⁃ｊｊｍ 基因，经ＥｃｏＲ Ⅰ和 Ｎｏｔ Ⅰ双酶切后连接至ｐＨＴ０１表达载体中，构建重组质粒；转化枯草芽孢杆菌，通过十二烷基硫 酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ）分析ＺＥＮ⁃ｊｊｍ蛋白表达水平。 高效液相色谱法（ＨＰＬＣ） 检测表达的ＺＥＮ⁃ｊｊｍ蛋白降解ＺＥＮ 的活性。 通过对母猪的繁殖性能的评价，确定ＺＥＮ 降解酶 降解ＺＥＮ 对母猪繁殖性能的影响。 双酶切和测序结果表明：ＺＥＮ⁃ｊｊｍ 成功插入ｐＨＴ０１ 中，ＳＤＳ⁃ ＰＡＧＥ表明获得 １株高效表达目的蛋白的重组枯草芽孢杆菌，其大小约为２９ ｋｕ。 ＨＰＬＣ 结果表 明表达的ＺＥＮ⁃ｊｊｍ蛋白能有效地降解ＺＥＮ；表达的ＺＥＮ⁃ｊｊｍ 蛋白能显著缓解ＺＥＮ 对繁殖母猪 的毒害作用（Ｐ＜０．０５）。 综上：１）本研究成功构建了表达ＺＥＮ⁃ｊｊｍ 在枯草芽孢杆菌中的表达载 体，并在枯草芽孢杆菌中得到了表达。 ２）表达的ＺＥＮ⁃ｊｊｍ 蛋白具有降解ＺＥＮ 的生物活性。 ３） 在饲粮中添加ＺＥＮ⁃ｊｊｍ蛋白能显著降低ＺＥＮ 对母猪能繁殖性能的危害。 关键词： 玉米赤霉烯酮；ＺＥＮ⁃ｊｊｍ基因；枯草芽孢杆菌；母猪 中图分类号：Ｓ８１６　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１７）１１⁃４０１９⁃０７ 　 　 玉米赤霉烯酮（ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ，ＺＥＮ）作为世界上 学方法都存在着劳动量大、试剂应用的可行性差， 污染粮食最广泛的真菌毒素之一，对其危害性的 而且对营养物质，尤其是小分子营养物质，如维生 研究很多，且由于ＺＥＮ具有雌激素作用，主要作用 素、药物具有破环作用，并且由于清除不彻底，很 － ［１ ３］ 容易造成二次污染。 于生殖系统，因此对妊娠期的动物危害最大 。 有研究表明母猪长期采食 ３～５ ｍｇ／ ｋｇ ＺＥＮ 污染 　 　 有研究表明，有益的芽孢杆菌类微生物在吸 的全价配合饲粮，在妊娠期会引起流产、死胎和畸 附和降解霉菌毒素和ＺＥＮ、黄曲霉毒素都发挥了 － ［５ ６］ 胎；后备母猪出现假发情，外阴肿胀、红肿，子宫受 重要作用，尤其对ＺＥＮ 的降解效果更加明显 。 损出血以及不发情的症状，从而给规模化猪场造 由于酶制剂的专一性、高效性，因此其可将ＺＥＮ彻 ［４］ 成不可估量的损失 。 因此研究有效清除 ＺＥＮ 底分解