马氏珠母贝精子质量检测与评价方法的研究-水产养殖专业毕业论文.docxVIP

J㈣Classified J㈣ Classified Index： $968．3l Security Classification： U．D．C．： 594 Security Period： Dissertation for the Master’S Degree The study of quality detection and evaluation n 0n tll e sDerm ol pmctaaa martensit Candidate： B in Chengyong Su pervisor： Prof．Yu Xiangyong Speciality： Aquiculture Resea rch field： Propagate of invertebrate and cultivation of pearl Universitv： Ocean Guangdong University Submission date： April 2010 广．东海洋大学 广．东海洋大学 学位论文原创性声明 本人郑：霞声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所 取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任 何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出蠹要贡 献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的 法律后果由本人承担。 作者签 刚舢日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文 被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或手‘1描等复制手段保存 和汇编本学位论文。 本学位论文属于l、保密口，在 年解密后适用本授权。‰ 2、不保密团。 (请在以上相应方框内打“√’’) 作者签名 20 13年6月If日 导师签铝 20 f口年6月f|日 摘要本论文以马氏珠母贝(Pinctada 摘要 本论文以马氏珠母贝(Pinctada martensii)为研究对象，通过染色观察来枪 测其精子活率、形态及质膜结构的完整性。以期为精子质量检测方法在贝类卜 的运用提供基础数据，为贝类精子质量检测体系的建立提供参考。 1．曙红Y染色法检测马氏珠母贝活精率的研究：取性腺发育良好的雄贝精 液作为检测样品。选择曙红Y、结晶紫等几种常规染料对马氏珠母贝精jf进行 染色处理，初步筛选出能用于马氏珠母贝精子质量检测的染料。在筛选出适合 染料后进一步研究染色液浓度及染色时问等指标，在此基础上对染液毒性、精 子自然死亡率等指标进行检测，并对染色后的实际死亡率和“理论死亡率”进 行相关性分析，总结分析出马氏珠母贝精子的最佳染色方法。结果发现：经曙 红Y染色后，活精子不着色，死精子着红色。对染液毒性等指标进行检测后表 明，曙红Y染色法可用于马氏珠母贝精子的检测与质量评价，该检测方法灵敏、 准确，结果可靠。曙红Y染色最适染液浓度为0．04％(终浓度)，染色时问以 15mill为最佳。 2．两种染色方法评定马氏珠母贝精子形态效果比较：以不同方法来制作马氏 珠母贝精液抹片，选择曙红Y及结晶紫染液对抹片进行染色处理，显微镜下对精予 形态进行观察分类，并确定主要的畸形类型及各畸形的特点。结果发现：精液与2％ 曙红Y染液等比混合后抹片，精子头部着深红色，尾部着浅红色，背景为浅粉红色， 对比明显，精子各部分结构清晰，形态特征明显，背景干净，易于观察。在制好的 精液压片边缘滴加0．5％的结晶紫染液，使用渗透染色的方法使染料渗入且均匀分 布，再拉丌或揭丌两张玻片，得到两张精子抹片，干燥后显微镜下精子头部着深紫 色，尾部着浅紫色，背景颜色为淡粉红色，对比明显，各部分结构清晰，染色特征 明显，可较准确的对精子形态特征作出判断。马氏珠母贝精子畸形主要集中存精子 的颁部和尾部，头部畸形情况较少。检测结果显示两种染色方法均町用于其形态检 测，但就制片难易程度而言，推荐使用曙红Y染色法。 3．结品紫水试验评价马氏珠母贝精子膜功能完整性的观察：吸取适量马氏珠 母贝精液于干净玻片上，滴加一滴蒸馏水并混匀，加盖玻片后沿玻片边缘滴加适嘬 0．5％结品紫染液，在玻片另一端用吸水纸吸取染液，使染液均匀渗入玻片，于／10 ×10倍姓微镜下观察精子尾部的肿胀情况，并进行计数统计分析。州时使』}j曙乡I：Y 染色法榆测精子活率来进行对比分析。结果显示：马氏珠母贝精液4i蒸馏水-l，发，l三 尾-,％Jl,t,II长现缘，精f着深紫色，辛宁景粉色，对比明碌，易·J：观察。尾郝UIUt王率‘JI职 红Y染色测得精’f活率经差异‘陀检验表明，二：者之11JJ Ji：尤!l