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淀粉酶产生菌的初选的实验报告 　　实验一淀粉酶产生菌的筛选　　一、实验要求：　　1、写出完整的分离纯化淀粉酶产生菌的实验步骤；　　2、写出分离培养基及其相关试剂所需的量、仪器、器皿所需的量；　　3、掌握从土壤分离酵母菌的方法和技术，从样品中分离出所需菌株；4、学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养淀粉酶产生菌的培养条件和培养时间。　　二、实验原理：用梯度稀释法来分离淀粉酶产生菌　　三、实验材料：　　1.培养皿、移液管、刮铲、显微镜等,　　2.可选取厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤;　　3.培养基与试剂:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、蒸馏水、琼脂粉。　　四、实验步骤：　　1、选定采土点后，铲去表土层2-3cm，取3-10cm深层土壤5g，装入灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌相的变化。　　2、培养基的配置，(1)分离培养基采用牛肉膏蛋白胨固体培养基加%可溶性淀粉即牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g、可溶性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中再加入15g琼脂粉pH调至121℃灭菌15min待冷却至50℃左右时于超净工作台倒平板。注:先将可溶性淀粉加少量蒸馏水调成糊状再加到溶化好的培养基中调匀;(2)分离培养基液体培养基采用牛肉膏蛋白胨固体培养基加%可溶性淀粉,即牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5(转载于:写论文网:淀粉酶产生菌的初选的实验报告)g、可溶性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中pH调至,121℃灭菌15min。　　3、取所采的土样5g加入到三角瓶中,加入无菌水45mL,30℃摇床振荡30min制成土壤悬液,此时的稀释度为10-1。另取7支试管分别记作10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8共8个梯度每支试管内加入9mL无菌水。用无菌移液管从三角瓶中吸取1mL土壤悬液加入到10-2试管中混匀,再从此试管中吸取1mL加入到10-2试管中,依此类推直至10-7试管。分别从10-6、10-7、10-8三个稀释度的试管中吸取100uL悬液,均匀涂布于分离培养基平板上,于27℃培养1-2天，等长出菌落后,将检测试剂卢戈氏碘液加入到平板中,菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株,因淀粉遇碘变蓝色,如菌落周围有无色圈说明该菌能分解淀粉。将水解圈直径与菌落直径之比较大菌株,即产酶能力较强的菌株的进行编号。　　4、纯化;将保存的菌株用接种环沾取少量培养物至平板上,并进行2-3次划线分离,挑取单菌落至平板上,培养后观察菌苔生长情况并镜检验证为纯培养。将纯化后产酶能力较强菌株保存至斜面培养基中培养.　　5、选择具有代表性的单菌落，用低陪显微镜在培养皿的反面观察每个菌　　落边缘生长特点，简要地描述菌落的质地、颜色和表面结构.　　五、实验报告：　　1.简述分离操作过程的关键无菌操作技术。　　2.将所分离的微生物平板菌落计数结果填入表中。　　表平均每克样品所含微生物数　　每克样品所含菌数=平均值×稀释倍数×10　　实验一淀粉酶产生菌的筛选　　及酶活力测定　　指导老师：辛树权　　生命科学学院08级生物技术班豆豆　　同组人：xxxxx　　摘要：自然界是微生物的大本营，实验室微生物几乎都是从自然界中选育出来的。我们从学校的花坛中采集一些土　　壤样本，拿到实验室中，进行淀粉产生菌的筛选。利用土壤制成菌液，将其涂抹在牛肉膏蛋白胨培养基上进行纯化，再用淀粉培养基培养，最后通过淀粉透明圈的大小来判断淀粉产生菌产淀粉的能力。再使用分光光度计精确测量淀粉酶的酶活力。　　关键词：淀粉酶；分离；纯化；透明圈；酶活力；摇瓶；分光光度计一、实验目的：　　1、学习从土壤中分离微生物的方法；2、学习淀粉酶产生菌的筛选方法　　3、了解分光光度计法测定酶活力的原理及方法。二、实验原理：　　土壤中含有大量的微生物，将土壤稀释液涂在不同类型的培养基上，在适宜的环境中培养几天，细菌或者是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养集中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。故在淀粉培养基上长出的菌便是淀粉产生菌。在培养基上滴碘液，淀粉被分解掉的部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断菌种产淀粉的能力。　　淀粉酶是指一类能催化分解淀粉分子中糖苷键的酶的总称，主要包括α－淀粉酶和β-淀粉酶等，α-淀粉酶可从淀粉分子内部切断淀粉的α-1,4糖苷键，形成麦芽糖、含有6个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖，是淀粉的粘度下降，因