棉蚜对氧化乐果和氰戊菊酯抗性的分子机制研究-农业昆虫与害虫防治专业毕业论文.docxVIP

型!量塑!塑塑型墨些墨墨翌!塑垡堑堕蒸竺塑坌±塑型竺茎中文摘要 型!量塑!塑塑型墨些墨墨翌!塑垡堑堕蒸竺塑坌±塑型竺茎 中文摘要 本实验分别圳氧化乐果和氰戊菊酯选育了棉蚜的有机磷类平¨拟除虫菊酯类杀虫约 剂抗性品系。研究了氧化乐果抗一tf$il敏感品系住不同底物F的羧酸酯酶活性、最人反府 速度(K。、)及米氏常数(^，m)，并对其进qiT酯酶同工酶的分析：克隆了氧化乐果抗 陆和敏感品系棉蚜的羧酸酯酶基囡，对抗性品系棉蚜的羧酸酯酶基因进行了体外表达： 以羧酸酯酶基冈为探针对氧化乐果抗性和敏感品系棉蚜的总DNA进行了杂交：克隆了 氰戊菊酯抗性和敏感品系棉蚜的钠离子通道基因片段。，结果如下： 1．刖氧化乐果和氰戊菊酯分别对采白河北廊坊地区自蝙蚜田间种群进行抗性选育，得 到了抗性倍数分别为17 1和199．5倍的两个抗性品系。 2 以d．乙酸禁酯(d．NA)、Ⅱ．丁酸萘酯(a．NB)、Ⅸ．磷酸萘酯(a．NP)和D．磷酸萘酯(D—NP) 为底物分别测定了氧化乐果抗性和敏感(SS)品系棉蚜羧酸酯酶的活性、最人反声 速度(K。。)及米氏常数(‰)，结果表明以d-NA、Of．一NB为底物时，抗性品系棉蚜 的羧酸酯酶活性显著低丁敏感品系棉蚜，而且以Ⅱ．NA为底物洲定H寸，抗性品系棉蚜 的米氏常数(五。)和最人反戌速度(‰。。)明显低于敏感品系棉蚜的。当以d．NP、 [3-NP为底物测定时，两个品系棉蚜的羧酸酯酶比活力、J0和‰。没有显著筹异。 酯酶同l：酶分析同样表明了抗性品系棉蚜羧酸酯酶活川低丁敏感晶系棉蚜。 3．利Hj RT-PCR扩增的方法克隆了氧化乐果抗性(RR)和敏感(WS和ss品系)品系 棉蚜的竣酸酯酶基因，抗性品系与WS敏感品系比较，有8个核茁酸的突变，其中 产生了4个氨基酸的突变；与新疆敏感品系(SS)比较有6个核苷酸的突变，其中 产生了4个与WS品系相同的氨基酸突变(苏氨酸一甲硫氨酸，大冬酰胺一赖氮酸． H氮酸一大冬氦酸．丝氨酸一苯丙氨酸)。SS品系和WS鼎系之间有6个核苜酸的 筹异，但都没有引起氨基酸的突变。 4 以羧酸酯酶基因为探针，用限制性内切酶(Hpall、Mspl)完全酶解氧化乐果抗性利 敏感品系棉蚜总DNA进行杂交。杂交图谱没有显著不同，表明抗性品系棉蚜没有基 冈扩增现象，而且在棉蚜的羧酸酯酶基因中没有甲基化现象。利用原核表达载体 pGEX一4T_l任体外表达了抗性棉蚜的羧酸酯酶基因，变性和非变性电泳检测表明表 达的夤闩是羧酸酯酶。 5．利崩RT-PCR扩增的方法克隆了氰戊菊酯抗性和敏感品系棉蚜的钠离子通道基冈片 孙鲁娟：棉蚜对氧化乐果和氰戊菊酯抗性的分子机制研究段， 孙鲁娟：棉蚜对氧化乐果和氰戊菊酯抗性的分子机制研究 段， 抗性品系的cDNA片段与敏感品系相比，有两个核苷酸发生了变化，亓由此导 致了 个氮基酸的突变(甲硫氨酸一亮氨酸)。 关键词：棉蚜，氧化乐果抗性，羧酸酯酶基因，氰戊菊酯抗性，钠离子通道基冈 II 型!量塑：塑塑翌基些墨墨塑墼垄堑塑垫壁塑坌主塑型竺型一——Abstract 型!量塑：塑塑翌基些墨墨塑墼垄堑塑垫壁塑坌主塑型竺型一—— Abstract Both organophosphate foPl·resistant and pyrethroid‘resistant strains of cotton aphids v,ere obtained by selection using omethoate and fenvalerate insecticides，respectively,in the laboratory、Carboxylesterase activity,the Michaelis constants(Kin)and maximum velocities (Hmx)in the OP—susceptible and resistant strains of cotton aphids were analyzed with different substrates，native polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)was used to analyze the isoenzyme difference between OP-susceptible and resistant strains of cotton aphids A cDNA encoding a carboxylesterase was cloned from the OP-susceptible and resistant strains，and the carboxylesterase gene from OP·resistant cotton aphids was