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细菌的药物敏感性实验报告 　　近年来，由于抗生素、磺胺等抗菌药物广泛应用，导致了耐药菌株不断出现。测定细菌对药物的敏感程度，对于临床治疗中选择用药，避免滥用药、及时有效地控制感染以及细菌鉴定，具有重要意义。　　细菌敏感度的测定方法很多，世界卫生组织推荐的方法为Kirby-Bauer纸片法，该方法具有操作简便、易于掌握、且重视性好的优点，本法是将含药纸片贴敷在接种细菌的琼脂平板上，利用含药纸片在琼脂上的扩散作用来测定细菌对药物的敏感性。K-B纸片法的原理是建立在抗菌药物抑菌环直径大小与细菌的最小抑菌浓度之间呈负相关的基础上，即抑菌环直径越大，则MIC越小。　　结果判定：按抑菌环直径大小报告敏感、中度敏感或耐药。　　敏感：是指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治疗。　　中度敏感：是指通过提高种抗菌药物的剂量或在该药浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染可被治愈。这类药物毒性较小，剂量可以加大。β-内酰胺类药物可出现中度敏感。　　耐药：是指被测菌株所引起的感染不能用常规剂量的抗菌药物所治愈。　　中介度：这一范围是“缓冲域”是由试验的误差造成的不作为报告形式。如确需明确的敏感度，应重复实验或做稀释法，抑菌环为中介度的药物不可提高剂量。　　最低抑菌浓度：抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。以针形接种器沾取菌液加至药盒各孔，35℃培养过夜，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的，即为MIC。　　最低杀菌浓度：抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。经48小时35℃培养后，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的，即为MBC。　　由于纸片法影响因素多，很难控制精度，现大多数医院采用MIC测定盒。　　MIC由经典二倍肉汤稀释演化而来，具有终点判断精确，重复性好，操作简便等优点。此方法采用病美国DYNATECH接种器，更具科学性。　　使用国产“华士达微生物自动分析仪”所做的定量药敏试验，报告自动由打印机印出，附印出抗菌素对受试菌的MIC外，还可提供各种药物的用量，给药途径及血和尿中可能达到的药物浓度一览表，供临床医师参考。　　纸片法抑菌环直径及其相当的MIC。　　表16-4抑菌环直径标准及其相当的MIC　　　　▲中介度：含意为模棱两可或不定。　　表16-5嗜血杆菌抑菌环解释标准及相应MIC分界点　　实训细菌的药物敏感性试验　　教学目标　　使学生掌握细菌药物敏感性试验的操作方法，能够利用本试验方法选择敏感药物治疗兽医临床常见的细菌性传染病。　　材料准备　　1．器材：温箱、天平、打孔机、滤纸、无菌试管及吸管、镊子、接种环、酒精灯等。　　2．试剂：蒸馏水。　　3．培养基：普通琼脂平板。　　4．菌种：金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的固体培养物。5．药品：链霉素、金霉素、新霉素、红霉素等抗菌药物。　　6．硫酸钡标准管：取1%~%氯化钡加1%硫酸溶液，充分混匀即成，用前充分振荡。　　方法步骤　　将抗菌药物置于接种待检菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，由此可根据抑菌环的大小，判定细菌对药物的敏感度。　　含药纸片的制备　　1．滤纸片最好选用新华1号定性滤纸，用打孔机打成直径6mm的滤纸片，放在小瓶中或平皿中，在℃灭菌15min，再置100℃干燥箱内烘干备用。　　2．药液的配制用无菌蒸馏水将各药稀释成以下浓度：磺胺100mg/ml、青霉素100IU/ml、链霉素、金霉素、新霉素、红霉素、多粘菌素1000μg/ml。　　3．含药纸片的制备将灭菌的滤纸片用无菌的镊子摊布于灭菌平皿中，按每张滤纸片饱和吸水量为计算，50张滤纸片加入药液。要不时翻动，使纸片充分吸收药液，浸泡1~2h后于37℃温箱中烘干备用。对青霉素、金霉素纸片的干燥宜采用低温真空干燥法，干燥后立即放入瓶中加塞，放干燥器内或置-20℃冰箱中保存。纸片的有效期一般为4~6个月。　　测验方法1．钩取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌落各4~5个，分别接种于肉汤培养基中，37℃培养4~6h。　　2．用灭菌生理盐水稀释培养菌液，使其浊度相当于硫酸钡标准管。装有以上两种成分的试管须相同，硫酸钡应用前需充分振动。　　3．用无菌棉拭子蘸取上述肉汤培养液，在试管壁上挤压除去多余的液体，在琼脂培养基表面均匀涂抹。每种细菌分别接种1~2个琼脂平板。　　4．用玻璃铅笔在平皿底部标记药物名称。一个直径9cm的平皿最多只能贴7张纸片，6张均匀的贴在距平皿边缘15mm处，一张位于中心。　　5．用灭菌镊子夹取干燥含药纸片，按标记位置轻贴在已接种细菌的琼脂培养基表面，一次放好，不得移动。　　6．37℃温箱中培养16~18h，观察、记录并分析结果。根据抑菌环直径的大小按实表2标准判定各