罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究-内科学肾脏病学专业毕业论文.docxVIP

郑州大学2005届硕士研究生论文 郑州大学2005届硕士研究生论文 罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究 罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮 细胞的保护性研究 研究生：李海剑 导师：刘章锁 郑州大学第一附属医院肾病内科 郑州450052 摘 要 【背景与目的】糖尿病肾病删abeticnephropathy,DN)是导致慢性肾功能不全的 常见原因之一。对糖尿病肾病的研究多年来一直聚焦于肾小球。近年来，随着对 肾小管闻质病变在肾脏疾病进展与预后中作用的研究。发现肾小管上皮细胞在糖 尿病肾病的发生发展中有着不可忽视的作用。 罗格列酮(rosiglitazone，RGZ)是近年应用于临床的一种噻唑烷二酮类 (thiazolidinediones，TZDs)胰岛素增敏剂，是过氧化物酶体增殖物激活受体 y(peroxisome proliferator—activated receptor T，PPARy)的配体，目前临床上主要作为 口服降糖药治疗2型糖尿病。～系列研究表明，除了改善机体胰岛素抵抗等代谢 调节作用外，TZDs还具有抗炎、影响细胞增殖和转分化、抗脏器纤维化等作用。 这些作用与肾脏疾病有着密切的联系。但有关TZDs类药物对糖尿病状态下肾小 管细胞直接作用的研究国内外尚未见报道，本实验旨在探讨罗格列酮对高糖刺激 下大鼠肾小管上皮细胞的保护作用及其机制，为临床TZDs类药物治疗糖尿病肾 病提供理论依据。 【材料与方法】常规方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)，首先用逆转 录聚合酶链反应(reverse transcription．polyInerase chain reaction，RT-PCR)检测 郑州大学2005届硕士研究生论文 郑州大学2005届硕士研究生论文 罗格列酮对高糖环境中大鼠肾小管上皮细胞的保护性研究 高糖作用24、48、72小时，PPART、转化生长因子-B1(tran幽咖inggrowthfactor·B1， TGF-8 1)和纤溶酶原激活物抑制因子·l(plasminogen activator inhibitor-1，PAd-1) mRNA表达，确定合适的时间点。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察不同浓 度的罗格列酮作用48小时对细胞增殖的影响，确定合适的罗格列酮实验浓度。 将细胞随机分为正常对照组NG(含1000 mg／LD．葡萄糖)、高糖组HG(含4500 mg／L D．葡萄糖)、HG+罗格列酮(RGZ跏tool／L)组、HG+罗格列酮(RGZ 1蚴tool／L)组和HG+罗格列酮(RGZ 15／zmol／L)组，均作用48小时，用RT-PCR 法检测PPARy、TGF-13 1和PAI-1 mRNA的表达，用蛋白印迹的方法(Western blotting)检测PPARy、TGF-B 1和d-平滑肌肌动蛋白f d-smooth muscle ac6n， a-SMA)的蛋白表达。采用One-Way ANOVA Test(单因素方差分析)比较各组 数据之间的差异。 【结果】 (1)高糖组PPAR丫mRNA及蛋白水平均显著高于正常对照，分别是正常组的5 倍和2．3倍(灰度值0．1加±o．036 0．694-+0．052，0．497+0．023 VS 0．212±0．034)， 三组浓度的罗格列酮均可减少PPARy的表达，且呈剂量依赖性。 (2)TGF-13 lmRNA及蛋白的表达与PPARv相似，高糖组明显高于正常组(约 2倍，O．589-+0．057vs 0．314_+0．041，0．617±0．027vs0．296±0．038,P0．01)，高糖培养基 中同时加入罗格列酮，TGF-13 1的高表达受到抑制(PO．05)，并且随着罗格列 酮浓度的增加，抑制作用越来越强，呈剂量依赖性，HG+R1跏mol／L组TGF-13 1 蛋白表达接近正常组水平，无统计学差异(P0．05)。 (3)在高糖组NRK52E细胞PAl．1的mRNA水平大约是正常组的2．5倍 (o．505_+0．043 VS 0．205±0．033)，HG+R 5／-mol／L组PAl-1表达与高糖组无显著差异 (P=O．402)，HG+RIOgmol／L组与HG+R15#mol／L组表达低于高糖组(尸O．01)。 (4)正常组NRK52E细胞可表达极微量的Q—SMA，高糖组Q—S姒蛋白水平显 著升高，是正常组的4倍(P0．01)，HO+R5pmol／L、HG+R1帆mol／L及 HG+R1和mol／L组a—SMA的表达均低于高糖组(P．(O．01)，且以剂量依赖方式逐 渐下降，HG+R1劬mol／L组d—SMA蛋白水平接近正常。 【结论】 1．高糖能够刺激NRK52E细胞P