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　　雷公藤甲素的含量检测分析 　　海棠合剂由雷公藤、竹茹、佛手、莱菔子、赤芍五种药味加工而成，具有清热解毒、祛风除湿、杀虫止痒的功效，适用于银屑病、湿疹、红斑狼疮等疾病[1]雷公藤为方中的君药，系卫矛科植物雷公藤的根、叶和花，其主要含有二萜类、生物碱类及苷类、糖类等。 　　其中主要活性成分之一是雷公藤甲素[2-3]又名雷公藤酯醇其与雷公藤的主要药理活性相关，具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节等作用[4-5],同时也是雷公藤引起毒副作用的主要成分[5-6],对心、肝、骨髓、胸、脾、肾及生殖系统等都有一定的毒性[7]准确测定雷公藤甲素的含量对控制海棠合剂的质量具有重要意义，故选择雷公藤甲素的含量作为成药含量控制指标。 　　1材料与方法 　　11仪器 　　仪器1200高效液相色谱仪美国安捷伦公司,1200二极管阵列检测器；-240电子天平，220电子天平日本岛津公司;-超纯水装置美国公司 　　12试药 　　雷公藤甲素标准品由中国药品生物制品检验所提供，批号111567-200502;乙腈为色谱纯，水为-装置制备的超纯水；其他试剂均为分析纯。 　　13色谱条件 　　色谱柱18色谱柱250×46,5μ;流动相乙腈-水，梯度洗脱0~20分钟，20→50;20~21分钟，50→20,流速10;进样量10μ;紫外检测波长220;柱温35℃;理论板数按雷公藤甲素峰计算，应不低于10000 　　14对照品溶液的制备精密称取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇制成每1含02对照品溶液。 　　15供试品溶液的制备 　　根据相关报道[8-10],本实验采用，精密量取海棠合剂50,加中性氧化铝15,水浴蒸干并混合均匀，用三氯甲烷作溶剂，湿法装入已有15中性氧化铝层析柱中，再用三氯甲烷200洗脱，合并流出液及洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解转移并定容至5量瓶中，摇匀，滤过，即得。 　　16阴性样品溶液的制备 　　取缺雷公藤阴性样品约50,同法制成阴性样品溶液。 　　2结果 　　21系统适用性试验及专属性考察 　　分别将雷公藤甲素对照品溶液，供试品溶液及阴性样品溶液各10μ,注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。 　　理论板数按雷公藤甲素峰计算，应不低于10000;缺雷公藤阴性样品溶液在雷公藤甲素峰相应位置上无吸收；15雷公藤甲素峰与其他组分峰基线分离。 　　见图1~3 　　22方法学考察 　　221线性关系考察 　　精密称取雷公藤甲素对照品111567-200502000524,置25量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为1号对照品溶液，精密吸取1分别置于10、100量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为2、3号对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液2号各1μ、2μ、4μ、6μ、8μ、10μ及3号1μ、5μ注入液相色谱仪，测定峰面积。 　　结果表明，雷公藤甲素进样量在002096~02096μ范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程和相关系数=1586937+2495342,=0999951为雷公藤甲素进样量，单位μ,为峰面积 　　222精密度试验 　　取同一份雷公藤甲素对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，结果为13223稳定性试验取同一批样品，在配制后0、4、8、16、24进样10μ,按14项的色谱条件下测定雷公藤甲素峰面积。 　　以峰面积计算，=059表明供试品在24内稳定性良好。 　　224重复性试验 　　取同一批样品，精密量取50,共6份，精密称定，按14项的色谱条件下进行分析，结果6份样品测得雷公藤甲素含量的平均值为015500,=140,表明该法有良好的重现性。 　　225回收率试验 　　精密量取已知含量的同一批供试品雷公藤甲素含量共6份，分别精密加入雷公藤甲素对照品溶液按13项下制备供试品溶液，在14项的色谱条件下记录峰面积，根据标准曲线求雷公藤甲素的含量，与加入量比较，计算回收率。 　　平均回收率为935,=295,符合定量分析要求，表明本实验方法具有较高的回收率，测定方法可靠。 　　见表1 　　226样品含量测定 　　取样品4批次，依次对雷公藤甲素含量进行了测定，每批平行测定2次，结果4批样品雷公藤甲素含量分别为015500、017500、015500、016500 　　3讨论 　　31雷公藤甲素为雷公藤药效学的主要基础物质，也是其主要的毒性成分。 　　采用测定方法能很好的分离海棠合剂中雷公藤甲素并能得到较好的色谱峰形，运用上述含量控制方法，考察了4批市售的海棠合剂，其中的雷公藤甲素含量每500在015~017间。 　　表明该方法重现性好，为海棠合剂中雷公藤的含量控制提供更有效的方法。 　　32流动相的选择试验，本次试验研究中流动相首先参照相关报道[11-13],由于本品处方药味多，成分复杂，等度洗脱难于达到理想的分离