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紫外可见吸收光谱法实验报告 　　实验一：紫外-可见吸收光谱　　一、实验目的　　1.熟悉和掌握紫外-可见吸收光谱的使用方法2.用紫外-可见吸收光谱测定某一位置样品浓度3.定性判断和分析溶液中所含物质种类二、实验原理　　紫外吸收光谱的波长范围在200~400，可见光吸收光谱的波长在400~800，两者都属于电子能谱，两者都可以用朗伯比尔定律来描述　　A=εbc　　其中A为吸光度;ε为光被吸收的比例系数；c为吸光物质的浓度,单位mol/L；b为吸收层厚度，单位cm有机化合物的紫外-可见吸收光谱，是其分子中外层价电子跃迁的结果，其中包括有形成单键的σ电子、有形成双键的π电子、有未成键的孤对n电子。外层电子吸收紫外或者可见辐射后，就从基态向激发态跃迁。主要有四种跃迁，所需能量ΔE大小顺序为σ→σ*n→σ*π→πn→π*　　1、开机　　打开紫外-可见分光光度计开关→开电脑→软件→联接→M进行调节实验需要的参数：波长范围700-365nm扫描速度高速；采样间隔：2、甲基紫的测定校准基线　　将空白样品放到比色槽中，点击“基线”键，进行基线校准标准曲线的测定分别将5ug/ml、10ug/ml、15ug/ml、20ug/ml甲基紫溶液移入比色皿，放到比色槽中，点击“开始”键，进行扫描，保存测定试样　　将试样甲基紫溶液移入比色皿，放到比色槽中，点击“开始”键，进行扫描，保存3、甲基红的测定校准基线　　将空白样品放到比色槽中，点击“基线”键，进行基线校准测定试样　　将试样甲基紫溶液移入比色皿，放到比色槽中，点击“开始”键，进行扫描，保存四、实验结果　　1.未知浓度的测定　　分别测定了5μg/ml，10μg/ml，15μg/ml，20μg/ml和未知浓度的甲基紫溶液的紫外吸收光谱，紫外吸收谱图如下：　　甲基紫在580nm是达到最大吸收见下表：　　各浓度在580nm的吸光度　　数据做成散点，结果显示，能很好的拟合直线如下图：　　由计算机计算的拟合直线的关系为A=-　　故带入未知浓度的甲基紫溶液的吸光度得浓度为μg/ml-1　　2.化合物的定性分析　　已知甲基橙和甲基紫的结构式如下图所示：　　甲基橙　　甲基红　　从图中可知，甲基紫约在580nm左右达到吸光度的最大值，而甲基橙溶液在410那么时达到吸光度最大值，这是由于甲基紫和甲基橙的结构不同造成的，由于甲基紫结构高度共轭，形成大π键，故最强吸收峰要的波长要比甲基橙的大，同时由于高度共轭，吸光强度也有所增强。　　一、实验目的　　1、学会使用UV-2550型紫外-可见光分光光度计。　　2、掌握紫外—可见分光光度计的定量分析方法。　　3、学会利用紫外可见光谱技术进行有机化合物特征和定量分析　　的方法。　　二、实验原理　　基于物质对200-800nm光谱区辐射的吸收特性建立起来的分析测定方法称为紫外—可见吸收光谱法或紫外—可见分光光度法。紫外—可见吸收光谱是由分子外层电子能级跃迁产生，同时伴随着分子的振动能级和转动能级的跃迁，因此吸收光谱具有带宽。紫外—可见吸收光谱的定量分析采用朗伯-比尔定律，被测物质的紫外吸收的峰强与其浓度成正比，即：　　其中A是吸光度，I、I0分别为透过样品后光的强度和测试光的强度，ε为摩尔吸光系数，b为样品厚度，c为浓度。　　紫外吸收光谱是由于分子中的电子跃迁产生的。按分子轨道理论，在有机化合物分子中这种吸收光谱取决于分子中成键电子的种类、电子分布情况，根据其性质不同可分为3种电子：形成单键的σ电子；　　形成不饱和键的π电子；氧、氮、硫、卤素等杂原子上的未成键的n电子。　　图1.基团中的σ，π，n成键电子　　当它们吸收一定能量ΔE后，将跃迁到较高的能级，占据反键轨道。分子内部结构与这种特定的跃迁是有着密切关系的，使得分子轨道分为成键σ轨道、反键σ*轨道、成键π轨道、反键π*轨道和n轨道，其能量由低到高的顺序为：σπnπ*σ*。　　图2.分子轨道中的能量跃迁示意图　　仪器原理是光源发出光谱，经单色器分光，然后单色光通过样品池，达到检测器，把光信号转变成电信号，再经过信号放大、模/数转换，数据传输给计算机，由计算机软件处理。　　三、仪器与溶液准备　　1、UV-2550型紫外—可见分光光度计　　2、1cm石英比色皿一套　　3、UVprobe电脑软件　　4、配置好的10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL以及未知浓度的甲基　　紫溶液，甲基红溶液　　5、仪器的基本构成：　　紫外可见分光光度计的基本结构如下：　　2　　将实验数据用excel作图可得到水杨酸和水杨醛的紫外可见分光波谱图，分别如图3和图4.　　图3实验1水杨酸的紫外可见分光波谱图　　图4实验2水杨醛的紫外可见分光波谱图　　图5实