紫外分管光度法测定核酸含量实验报告(共5篇).docxVIP

紫外分管光度法测定核酸含量实验报告(共5篇) 　　班级：同组人姓名：学号：　　姓名：　　实验一：紫外分光光度法测定核酸的含量　　核酸是核苷酸单体聚合而成的生物大分子，是生物细胞最基本和最重要的成分，根据核酸的物理和化学性质，应用一种简便、快捷、准确的方法，达到测定核酸含量的目的。　　1：元素分析表明，RNA含磷量平均为%，DNA含磷量平均为％，由此可以推导出核酸质量约为其含磷量的11倍，因此可从测得的核酸样品的含磷量计算核酸的含量。　　2：DNA、RNA分子在强酸作用下降解的糖，再与浓酸、酚或胺生成的有色化合物，其颜色深浅与核酸含量呈正比，因此通过比色法可测得核酸的含量。　　3：核酸分子中的共轭π键具有紫外吸收性质，核酸溶液的吸收度与核酸的浓度呈正比，可用作定量测定。　　常用紫外可见分光光度计进行测定，分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称紫外-可见分光光度法。　　1.材料和方法　　材料　　核酸样品DNA　　方法实验器材和试剂　　器材：分析天平、离心机、容量瓶、紫外分光光度计、吸管　　试剂：氨水、钼酸铵-高氯酸、　　实验步骤　　当待测的核酸样品中含有酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸，在测定时需要加钼酸铵-过氯酸沉淀剂，沉淀除去大分子核酸，测定上清液260nm处光密度作为对照。　　(1)取2支离心管，每管各加入2mL待测的核酸溶液，再向甲管内加2mL蒸馏水，向乙管内加2mL沉淀剂。混匀，在冰浴(或冰箱)中放置10min，3000r/min离心10min。将甲、乙两管清液分别稀释至光密度在~之间。选用光程为1cm的石英比色杯，在260nm波长下测其光密度OD260nm。　　计算DNA含量。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度服从朗伯―比尔定律。　　利用紫外吸收法测蛋白质含量的准确度较差，原因有二：①对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定误差，故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质；②样品中含有的嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会出现较大干扰。三、仪器与试剂　　TU―1901紫外可见分光光度计、标准蛋白质溶液·mL-1、%NaCl溶液、试样蛋白质溶液。　　10mL比色管、1cm石英比色皿、吸量管。四、实验步骤　　1.绘制吸收曲线　　用吸量管吸取·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以%NaCl溶液作参比溶液，在190~400nm间每隔5nm测一次吸光度Abs，记录数据并作图。　　2.绘制标准曲线　　用吸量管分别吸取、、、、·mL-1标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用%NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以%NaCl溶液作参比溶液，在波长280nm处分别测其吸光度，记录数据并作图。　　3.样品测定　　取适量浓度试样蛋白质溶液，在波长280nm处测其吸光度，重复三次。在已经得到标准曲线的情况下，为了使测量结果准确度高，待测溶液的浓度需在标准曲线的线性范围内，所以，先测定试样蛋白质原液的吸光度，估算浓度为mg·mL-1，再将原试液稀释至5倍，估算浓度为mg·mL-1，测吸光度，重复三次五、数据处理与结果分析　　图1吸收曲线　　在上图吸收曲线中可以看到有两处吸收峰，且在波长225nm处的吸收峰远大于280nm处，这是由于在波长250nm以下时，溶剂吸收较为严重，干扰较大，所以，蛋白的最大吸收波长应为280nm。　　图2标准曲线　　将试样所测得吸光度带入标准曲线中求蛋白质含量：　　稀释以后的蛋白质的浓度cx=()/　　原试样中蛋白质浓度c=(cx*10)/2　　单次测定的标准偏差:　　s=　　?(c　　i　　?1　　n　　i　　?c)2　　?　　n?1　　??=　　2=　　?100%=%相对标准偏差：sr=?×100%=　　c　　紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量　　一、实验目的　　1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法；2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。　　二、实验原理　　维生素C是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变,两者均具有生物活性(结构式见(来自:写论文网:)图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H+,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机