慢病毒介导的骨桥蛋白RNA干扰对人U251胶质瘤细胞在裸鼠体内生长的影响-病理学与病理生理学专业毕业论文.docxVIP

慢病毒介导的骨桥蛋I刍RNA干扰对人U251胶质瘤细胞 慢病毒介导的骨桥蛋I刍RNA干扰对人U251胶质瘤细胞 在裸鼠体内生长的影响 中文摘要 目的研究慢病毒介导的骨桥蛋白RNA干扰对人U251胶质瘤细胞在裸鼠体内生 长的影响并探讨其对胶质瘤生长、侵袭的可能机制，为胶质瘤的基因治疗提供新 的靶点。 方法应用RNA干扰技术，将已成功构建的针对人OPN基因的慢病毒干扰载体 LV-OPNshRNA及对照组空载体LV-N-OPN分别感染U251细胞。将未感染组U251 细胞、空载体感染组U251细胞(LV—N—OPN／U251)、LV-OPNshRNA慢病毒感染组 U251细胞(LV一0PNshRNA／U251)分别接种于裸鼠皮下，建立裸鼠荷瘤模型。每 天观察裸鼠活动情况及皮下移植瘤的生长，每3天测量皮下肿瘤大小。三周后断 颈处死裸鼠，测量肿瘤的体积、瘤重。苏木素一伊红染色观察肿瘤组织病理形态 学变化；半定量RT-PCR法和Western blot法分别检测OPN及相关分子uPA、 MMP一2、MMP-9的mRNA和蛋白表达变化；免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度 (MVD)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达情况。 结果1．与未感染组、空载体感染组相比，LV—OPNshRNA／U251感染组裸鼠皮下肿 瘤生长缓慢，肿瘤体积及重量均明显减小，差异有统计学意义(尸m彻。 2．苏木素一伊红染色结果显示，未感染组、空载体感染组肿瘤细胞异型性明 显，侵袭能力强。 3．半定量RT-PCR及Western blot结果表明，LV—OPNshRNA／U25l感染组与 其它两组相比，OPN的mRNA和蛋白表达均明显下降，同时uPA、MMP一2、MMP一9 的mRNA和蛋白表达也明显下降，差异有统计学意义(尸以∞。 4．免疫组化实验显示，与其它两组相比，LV一0PNshRNA／U251感染组的MVD 值和VEGF的表达水平均显著降低，差异有统计学意义(尸以砌。 结论应用慢病毒载体介导的RNA干扰技术，特异性地沉默U251细胞中OPN基 因的表达，能够明显抑制人U251胶质瘤细胞在裸鼠体内的生长和侵袭。半定量 RT-PCR、Western RT-PCR、Western blot及免疫组化的结果表明OPN可能通过激活uPA、MMP一2和 删P一9等蛋白酶降解细胞外基质和促进肿瘤的血管生成，参与胶质瘤的生长和侵 袭。本研究结果表明OPN基因有望成为胶质瘤治疗的新靶点。 关键词慢病毒载体骨桥蛋白RNA干扰胶质瘤裸鼠 4 The The effect of the lentivirus-mediated RNA interference targeting osteopontin on the growth of U25 1 cells in vivo Abstract objective To observe the effect of the lentivirus-mediated RNA interference targeting osteopontin on the growth of human brain glioblastoma U25 1 cells in vivo of nude mice and to investigate the mechanism of OPN gene on the proliferation and invasion of glioma．We want to provide a new target of gene therapy for glioma． Methods U25 1 cell，LV-N-OPN／U25 1 cells transfected with blank lentivirus vector, LV-OPNshRNA／U25 l cells transfected with shRNA lentivirus vector targeting osteopontin，were injected respectively into the oxter of the nude mice to establish the xenografl．The tumor growth was observed and measured．Histopathological changes Was tested by hematoxylin-eosin staining．The mRNA and protein expression of OPN， uPA，MMP-2，MMP一9 were measured by RT-PCR and Western blot．The micro