绿豆癀护肝解毒作用及其机制研究-中西医结合基础专业毕业论文.docxVIP

匀浆液，4500 匀浆液，4500 rpm离心10min，取上清液注入试管，．20℃保存。按照试剂盒说明 书的方法测定肝组织内GSH、MDA、TG含量；另取部分肝右叶，用10％甲醛固 定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察肝组织形态学变化。 (3)绿豆癀调节血脂作用的实验研究 参照文献方法，用1％胆固醇，0．12％甲基硫氧嘧啶，O．13％胆盐，7．75％猪 油，10％蛋黄粉，81％基础饲料制成高脂饲料；绿豆粉和绿豆癀均加工成颗粒饲 料。将60只Wistar大鼠随机分为6组：正常对照组，模型组，绿豆粉组，绿豆 癀高、中、低齐4量组，每组10只，雌雄各半。绿豆粉组和绿豆癀高、中、低剂 量组大鼠每只一个笼子单独喂养。大鼠食量按259／天d只计算，正常对照组喂普 通饲料；模型组大鼠每只每天喂高脂饲料17．59+普通饲料7．59；绿豆粉组大鼠每 只每天喂高脂饲料17．59+59绿豆粉+普通饲料2．59；绿豆癀低剂量组大鼠每只每 天喂高脂饲料17．59+绿豆癀2．59+普通饲料59；绿豆癀中剂量组大鼠每只每天喂 高脂饲料17．59+绿豆癀59+普通饲料2．59；绿豆癀高剂量组大鼠每只每天喂高脂 饲料17．59+绿豆癀7．59。连续40天。末次喂饲后，禁食12h，腹主动脉取血， 血液静置3h，待凝固后分离血清，3000rpm离心10rain，取上清液注入EP管， ．20℃保存，按试剂盒说明书，用分光光度计分别测定TG、LDL-C、HDL-C值。 (4)绿豆癀对肝GSH、GST影响的实验研究 待动物适应环境1周后，将60只动物按体重随机分为6个组：空白对照组， 泼尼松龙组，绿豆粉组和绿豆癀高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。空 白对照组和泼尼松龙组每天用0．5ml饮用水灌胃；绿豆粉组每天用0．5ml绿豆粉 液灌胃；绿豆癀高、中、低剂量3组每天用相应浓度绿豆癀液O．5ml灌胃。正常 喂养，连续15d，除空白对照组外，其余各组从灌胃第8天开始每天皮下注射泼 尼松龙(PSL)15mg／kg，连续5d。小鼠在末次给药后，摘眼球取血处死，离心 分离血清，取肝脏用Tris．HCl 50 mmol／L(pH 7．4)制成25％肝匀浆，差速离心法 制备微粒体及线粒体，．30℃保存。谷胱甘肽(glutathione，Gs团含量按Ellman法 测定，谷胧甘肽还原酶(glutathionereductase， GSH．Re)活性依文献及试剂盒规定 方法测定。 (5)绿豆癀对肝CYP同功酶影响的实验研究 将动物按体重随机分为5个组：空白对照组、绿豆粉组和绿豆癀高、中、低 剂量组，每组10只，雌雄各半。空白对照组每天用0．5ml生理盐水灌胃；绿豆 粉组每天用0．5ml绿豆粉液灌胃；绿豆癀高、中、低剂量3组每天各用相应浓度 绿豆癀液0．5ml灌胃。正常喂养，连续10d。10天后断头处死，取肝脏，按照钙 沉淀法制备微粒体。肝微粒体制备：将肝组织制各成20％的匀浆，按每克肝组 织加4mlO．25mol／L蔗糖溶液或pH7．5TMS缓冲液(Tris，HCl、MgCl2)及蔗糖， 磨成匀浆。将组织匀浆置低温高速离心， 120009， 30分钟，以沉淀未破碎的 H 细胞、细胞碎片、核及线粒体。所得上清液即线粒体后上清液，小心倒出上清液， 细胞、细胞碎片、核及线粒体。所得上清液即线粒体后上清液，小心倒出上清液， 备用。取适量线粒体后上清液加CaCl2液(终浓度8retool／L)，稍搅拌混合，放 冰浴5分钟，高速离心机27000×g离心15分钟。用Lowry比色法测定肝微粒 体的蛋白含量，用牛血清蛋白质做标准曲线，光谱测定P450含量，消光系数为 105mmol(Lcm)，按照文献方法测定细胞色素P450(CYP)含量、7．乙氧异恶唑 ．O．脱乙基酶0EROD)、苯胺羟化酶(ANH)、红霉素N．脱甲基酶OERD)的活性。 2、药学试验研究 (1)绿豆癀中蛋白质的测定；2)绿豆癀中氨基酸的测定；(3)绿豆癀中不 溶性膳食纤维的测定；(4)绿豆癀中核黄素的测定；(5)绿豆癀中胡萝b素的测 定；(6)绿豆癀中硫胺素的测定；(7)绿豆癀中烟酸的测定 三、研究结果 1、药理试验结果 (1)绿豆癀抗CCh肝损伤作用的实验结果 AST、ALT：与正常对照组相比，模型组小鼠血清AST、舡r含量均明显 升高(PO．OD，表明CCl4肝损伤造模成功。绿豆癀低、申剂量能抑制小鼠血清 AST的升高但O．05)，绿豆粉和绿豆癀高剂量均能抑制小鼠血清AST升高，但 与模型组相比无统计学意义；绿豆粉和不同剂量的绿豆癀均能抑制小鼠血清ALT 的升高(P0．Ol或P0．05)；而绿豆癀低剂量组比绿豆粉组有更好的效果(P0．05)。 肝组织病理：与正常对照组相比，模型组小鼠肝细胞气球样变、脂肪变性