抗真菌农用抗生素的分离及应用研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

本研究 本研究 获雅安三九药业奖学金 资助 论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的 论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个 人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机 构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： ，绎 习匆。矿 q毋6月ZtEI 关于论文使用授权的声明 本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不 同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 研究生签名 年彩谚 ?伽瞬‘月。佣 导师签名： 1旷巧t-6月2r-n 摘要据FAO统计，全世界农林业中每年因虫害、病害和杂草危害造成的损失占总产 摘要 据FAO统计，全世界农林业中每年因虫害、病害和杂草危害造成的损失占总产 值的37％，损失额高达1260亿美元，相当于中国农业总产值的一半，英国的4倍多。 化学农药在痫虫草害的防治上一直居于主导地位，但高毒高残留化学农药的大量使用 正在严重威胁着我们赖以生存的地球环境和人类健康。发展和应用生物农药已逐渐成 为一种趋势，而且随着公众对绿色食品和无公害食品的要求越来越高，生物农药的市 场前景也越来越广阔。农用抗生素作为生物农药的主体，因其具有低毒高效、选择性 强、残留时间短、无三致(致癌、致畸、致突变)和无公害等优点，『F日益受到世界 各国的重视，如井冈霉素、阿维霉素、中生菌素和宁南霉素等在植物病虫害防治上已 广泛被应用并做出了突出贡献。本文针对植物真菌病害进行农用抗生素的筛选、分离 和田间小区试验等研究，结果如下： 1、在四川雅安和温江两地共采集到土样11份，采用稀释分离法从中分离到放线 菌253株，细菌886株。采用平皿拮抗测定法进行抗植物病原真菌拮抗菌的筛选获得 有拮抗活性的放线菌51株，细菌173株，分别占总数的20．16％和19．53％。通过代 谢物抑菌活性强弱、物化性质及稳定性等确定了优势拮抗菌株D一2和LM．3。经形态 特征、培养特征、细胞壁化学组分分析和生理生化分析，D，2菌株和LM．3菌株分别 鉴定为烬灰吸水链霉菌和多粘类芽孢杆菌。 2、平皿拮抗测定显示D一2菌株在PDA平板上对稻瘟病菌、油菜菌核病菌、小麦 赤霉病菌和黄瓜枯萎病菌的抑菌率分别为92．2％、78．9％、53．3％和52．2％。D一2菌株 发酵液经乙酸乙酯萃取和浓缩得橙黄色抗生素粗提物，抗生素在酸性环境下稳定性较 差，中性或偏碱性环境下80。C处理1 h、可见光(4 000 lx)处理12 h以及紫外线 (2 400 Ix)处理4 h活性均保持不变。通过硅胶柱层析和硅胶薄层层析得到了主要 的纯活性组分。选择不同的溶剂和乳化剂交叉配制成9种生物农药进行田间小区试 验，结果表明：以甲醇作溶剂，吐温80作乳化剂防效最好，达65．69％。 3、研究了LM一3菌悬液浸种、浸芽和浇苗3种处理对水稻的生长促进作用和对 越氧化物歧化夔、避氯化氦黪和避氧化物酶3耱保护熬懿诱嚣表达据爆。结果表强： 以2×106 cfu／ml的细胞浓度浇灌幼苗对水稻的生长促进作用最好，菌高等备项生理指 豁均显蘩毫予对照及其它娥疆；瓣3静保护酶：努莓蓖好懿诱导表这佟羯。采躅簸辑 法提取获得了该菌株的抗菌多肽，抑菌活性测定表明抗菌多肽对辣椒炭癞病菌等多 种植物瘸原奏蘩有强黧豹生长季乖翻作瑶。抗菌多获对链霉蛋翻酶E和获鬣自酶不敏 感，对缀自酶K部分敏感；高温(120℃)处理20 min后抗菌多肽仍保留84．71％的 滔性；液碱处理发现抗菌多肢在pH 8．5时最为稳定，而在pH 2．5时80℃处理1 h 完全失去活性；25 完全失去活性；25 W紫外灯(2400 lx)照射8 h对其活性没肖影响。经SDS分褥，该抗蘧多获夔分予爨分子6 kDa秘14。2 k1)a之阗。 关键词：农用抗生素；烬灰吸水链霉菌；多粘类芽孢杆菌；稻瘢病 2 AbstractIt Abstract It is reported by FAO that 37％of the ompm value in agriculture and forestry is lost because of insects，diseases and weeds every year,the lost money,which equals to half of Chin