面颌肌细胞力学刺激细胞培养模型的建立及张应力对烟碱样乙酰胆碱受体表达变化影响的体外研究-口腔临床医学专业毕业论文.docxVIP

四川大学博士学位论文面颌肌细胞力学刺激细胞培养模型的建立及张应力 四川大学博士学位论文 面颌肌细胞力学刺激细胞培养模型的建立及张应力 对烟碱样乙酰胆碱受体表达变化影响的体外研究 导师 罗颂椒教授 赵志河教授 研究生高辉 中文摘要 在功能矫形治疗中，不仅硬组织发生改建，相应的软组织也会发生适应 性改变，以适应新的功能环境。颌面部肌肉结构和功能的适应性改建是功能 矫形治疗成功的一个关键因素。以往的动物模型显示，功能矫治后，大鼠翼 外肌及浅层咬肌烟碱样乙酰胆碱受体(nAChR)数量增加。但是有关功能矫 形中，颌面部骨骼肌乙酰胆碱受体变化的细胞和分子机制了解『}勺还很少。为 了排除神经刺激和骨骼肌卫星细胞增殖、分化对功能矫形治疗中nAChR数 量变化的影响，本研究在体内实验的基础上，使用体外细胞培养一应力刺激 模型，进一步研究张应力对骨骼肌细胞自身乙酰胆碱受体表达变化的影响。 分离出生后2～3天BALB／C小鼠颁面部骨骼肌进行体外原代培养，并 使用分化培养基促进细胞分化。细胞生长分化良好，最终有单个核细胞变为 多核的骨骼肌细胞。免疫细胞化学技术显示，细胞呈o．肌动蛋白阳性，阳性 产物分布在细胞质内。 使用以下检测技术研究张应力和受体失敏对体外培养颌面部骨骼肌细 胞nAChR表达变化的影螭：放射受体分析法，评价张应力作用后细胞表面 四川大学博士学位论文nAChR数量的变化：半定量RT．PCR技术检测nAChR 四川大学博士学位论文 nAChR数量的变化：半定量RT．PCR技术检测nAChR a亚基的基因转录水 平。 结果如下： 1．张应力刺激使骨骼肌细胞表面nAChR数量减少，各加力时间段间无 明显差异。 2．张应力使nAChRn亚基的基因转录水平降低。 3．失敏作用能明显提高nAChR n亚基的基因转录水平。 4．张应力刺激后，加入乙酰胆碱使受体失敏后发现，与末加力的失敏 组比较，加力的最初阶段，nAChRn亚基的基因转录水平降低，随加力时问 的延长，基因转录水平明显增强，随加力时间的延长，变化量逐渐增加。 本研究结果提示，功能矫形治疗中，骨骼肌细胞nAChR的变化受神经 影响很大，张应力的刺激可以增加肌细胞对神经刺激的敏感度，牵张应力与 神经刺激间有协同作用。 关键词：骨骼肌细胞 烟碱样乙酰胆碱受体 应力 细胞培养 四川I大学博士学位论文Establishment 四川I大学博士学位论文 Establishment of maxillofacial skeletal Myocyte culture model for stretch and studies of Nicotinic Acet)7lcholine Receptor(nAChR)expression changes by stretch in vitro Tutor Professo Luo Songfiao Professor Zhao Zhihe Postgraduate Gao胁f (Abstract) During Functional orthopedic therapy,not only the remodeling of hard tissue but also the adaptation of the soft tissue of oral system will happen in a new mechanical environment．The structure and function of these muscles remodeled adaptively,is a crucial factor for a successful outcome．In particular，lengthening of the muscle in maxillofacial region has to keep pace with lengthening of the bone，otherwise，the beneficial effects of the treatment will be retarded．Animal model indicated that the rat’S lateral pterygoid muscle(LPM)and superficial masseter muscle nAChR increased while wearing functional appliance，Despite numerous observations showing the plasticity of muscle in response to different conditions，very little is known about