红细胞渗透脆性与白细胞染色实验总结.pptVIP

药学2班 陈旭宇 李佳朋 讲解内容 实验概述 预实验情况 正式实验情况 创新实验 实验概述 预实验情况 预实验目的： 1、观察不同浓度的低渗盐溶液对红细胞的影响，加深理解细胞外 液晶体渗透压相对稳定对维持细胞正常形态与功能的重要意义 2、熟练白细胞染色的操作，理解瑞氏染液、吉姆萨染色的作用 3、查阅相关文献，加深对实验的理解，掌握更全面信息 4、总结实验的一些注意事项和操作技巧，预知实验可能出现的问题，做好应对措施 5、清楚实验的大致结果，给同学们作为参考 染色原理： 血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质； 细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质； 预习探究一：由于开始的两次实验，我们都习惯先将羊血存于冰箱中保存，然后取出再在室温下实验。考虑到正式实验当天，我们会使用刚取回的羊血（未经冰箱冷却实验）进行试验。考虑到这些温度和时间上的差异，我们有必要进行模拟实验，来探究正式实验环境下的合理范围。 表2：第一次取血红细胞渗透脆性实验结果 表3：第二次取血红细胞渗透脆性实验结果 表4：第三次取血红细胞渗透脆性实验结果 结论： 1、血红细胞离体时间越长渗透脆脆性越大； 2、实验室内同一天内的温度变化在 15℃——28℃范围内，对实验结果影 响不明显。 3、羊血不经冰箱储存冷却，在实验室温度环境下，离体3——5h,预计实验结果为： 最小抵抗力浓度：95——104mmol/L 最大抵抗力浓度：69——78mmol/L 实验操作总结：（供以后实验同学们参考） a.溶液用前应现配，以免水分蒸发，改变离子浓度。 b.溶血的结果判断，应首先在室温下静置一个小时湖再观察结果，先从高浓度观察，上层初现透明红色为开始溶血管，溶液透明深红色、管底红细胞完全消失者为完全溶血。如不易判断可低速离心1分钟后观察。 c.器材必须清洁干燥，避免引起其他异物影响所致溶血。 d. 红细胞脆性实验中，可以先向每个试管中加氯化钠然后再加蒸馏水，加的时候还有个小技巧，以氯化钠为例，先将几个大于1000uL的试管中都加上1000uL的氯化钠，然后再按900,800到100uL递减的顺序依次加这样可以节省时间 e.血必须直接注入试剂中，不可沿着管壁。试验中我们直接用的滴管取血，可能试管中的血量有差距，建议后面用微量移液器定量取血排除观察溶血状况时，血量不同带来的影响 f.血液和盐溶液时不要用力震荡，静置及观察时不要移动试管。 g.染色必须得等到血片干燥后进行，否则染不上色 h.血膜的冲洗时水流不能太急，防止将血膜冲掉，应用蒸馏水冲血片的上方，然后滑落下的水流冲洗血膜 实验2：细胞染色实验 药品准备： 缓冲液配制：1%KH2PO4+1%NaHPO4(20ml),加水至1000ml，置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染。 姆萨染液配制：药品：吉姆萨染料（粉末）0.5g、甲醇 （AR）33ml、甘油（AR）33ml 方法：先将吉姆萨染料放入研钵中，逐渐到甘油研磨溶于甘油中，置于58℃水温箱内90--120min，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。 （此染液放置室温阴暗处，时间越长越好） (2）实验过程 开始时，一切从零开始，我们的血片制备很不合格，要么过厚，要么不均匀。在耿姝学姐手把手讲解之后，我们不耐其烦，连续联系制作了近30个血片，终于能够制作出厚度适宜，效果成功的血涂片，并掌握了制片的技巧。 联系生物实验一中白细胞计数时应用白细胞液破坏红细胞的经验，我们在染色之前对血液使用白细胞稀释液排除干扰，但是染色结果与不加白细胞染色液相比反而较差，影响染色效果。分析原因有可能是白细胞染色液引起了PH的改变，或产生液膜稀释了染液，最后否定了加白细胞稀释液进行染色的方案。 经验总结 推片经验： 用移液枪头沾取羊血点置于载玻片上，呈米粒大小，将推玻片保持与载玻片约30度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向后滑动，至血膜铺匀。 正式实验 实验准备： 我们在周三下午将PPT交与李老师征求修改意见，并在当天晚上修改完毕。 于周四晚上，准备好实验所需各项仪器与药品，并写好板书。 周五早上上课前取回羊血。 实验过程： 实验过程无迟到、旷课、早退现象，同学们热情度很高，认真实验。 对同学的操作过程进行严格把关，使绝大多数同学的实验取得了预期的结果，其中章梦甜、陶倩组白细胞染色观察效果非常好，能观察到多个白细胞清晰镜像。 白细胞染色出现问题主要为以下几点： 1、血膜涂得过厚，造成观察困难； 2、对染液进行冲洗时不彻底，造成着色过深，出现一大片蓝的现象； 3、冲洗过猛，观察