毛竹等36种竹类植物的RAPD分析-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

摘要应用随机扩增多态DNA(RAPD)标记，分别对11属35种苦笋竹类植物进行亲缘关 摘要 应用随机扩增多态DNA(RAPD)标记，分别对11属35种苦笋竹类植物进行亲缘关 系分析，对10个天然届群135个毛竹(Phyllostachyspubescens)样本和两个种源试验 地的16个毛竹种源32个样本进行遗传多样性和遗传结构分析。结果如下： 1．筛选了适合于竹类植物RAPD扩增的反应体系：反应总体积10止，含模板DNA 5n∥gL-MgCl22．0mmol,L。dNTP 0、2mmol／I．,t引物0．31tmol／L，Taq DNA聚合酶O，5u。 扩增程序：94C预变性120s：94C变性30s，40C复性30s，70(2延伸90s，循环38次： 720延伸420s，4C结束。 2．RAPD分子标记对11属35种苦笋竹类植物的分析结果表明：35种苦笋竹类植 物可以分为两个区：即丛生竹类区与散生竹和复轴混生竹类区。其中，丛生竹类区属 间与属下等级的RAPD聚类结果与形态学分类基本一致；散生竹类、复轴混生竹类以 及散生竹与复轴混生竹属间与属下等级的RAPD聚类结果与形态学分类不完全吻合： 此外，RAPD分析支持酸竹属(Acidosasa)酐J粉酸竹口．chienouensis)与大节竹屈(Indosasa) 的橄榄竹(Lgigantea)并归一属，同时支持将粉酸竹划归大节竹属。 3．对福建省10个天然居群135个毛竹个体的RAPD分析结果表明：①毛竹种水 平的多态条带比率(PPB)为75．47％，Shannon多样性指数∽为0．241 8，Nei’s基因多样 度∞)为0、1578，表明毛竹种水平的遗传多样性相当高。10个毛竹天然居群中，寿宁(SN) 居群的遗传多样性最高．其次是尤溪(Yx)居群，而建瓯．迪EIOD)及龙岩(LY)居群的遗 传多样性相对较低：(②AMOVA分析表明，68．46％的变异存在于居群间，31．54％的变 异存在于居群内，说明毛竹居群间存在极显著的遗传分化；匿)UPGMA聚类结果将10 个毛竹天然居群聚为两大支：一支含武夷山．坳头(wA)、龙岩(LⅥ、永安ⅣA)和尤溪(Yx) 等四个居群，另一支含武夷山．大竹岚(wD)、顺昌(sc)、建瓯。房道OF)、漳卅I(ZZ)、 寿宁(sN)和建瓯-迪口(JD)等六个居群。 4．对16个种源32个毛竹个体的RAPD分析结果表明：不同种源间存在明显的地 理变异。UPGMA聚类结果将16个种源划为两个区：第1区由浙江衢县(6)、广东从化 (I o)、广东乐Pa(9)--三个种源组成，第1I区由其余13个种源组成。第1I区中，福建的6 个种源以北纬27。，东经118。为界聚为两支，即经纬小于118。E270N的福建沙县04)、 福建龙海(16)、福建华安(15)3个种源聚为一支，经纬大于l 18。E 271,1的3个种源『福 建武夷(1 1)、福建松溪(12)、福建建瓯(13)】聚为另一支；剩下的七个种源[湖南株洲(5)、 江两九江(7)、江苏句容(1)、江苏宜兴(2)、安徽霍d4(3)、湖北武汉(4)、江西上饶(8)]则 聚为又一支。 关键词：竹；毛竹：亲缘关系；遗传多样性，遗传结构；RAPD AbstractThe Abstract The relationship of thirty-five species bamboo．and the genetic diversity and genetic structure of nature population and provenance of Phyllostachys pubescens were studied by random amplified polymorphic DNA(RAPD)．The thesis was composed offour parts： 1．Effects of the content oftemplate DNA，Mg”，dNTPs，primers and Taq DNA polymerase on RAPD results of bamboo were examined．The results showed that each 10儿 amplification reaction solution was consisted of 5ng／IxL template DNA，2．Ommol／L MgCl2，0．2mmol／L dNTPs，O．3p_mol／L primer，0．5U Taq DNA polymerase．The amplification procedure conditions were pre-denature at 94(2 120s followed