DNA的重组与转座培训教材.pptVIP

第 6 章 DNA的重组与转座 Chapter 6 DNA Recombinant and Transposition;1、通常DNA自发变化都是通过 作用很快 被校正，但在极少情况下，DNA将变化的部分保 留下来导致永久的序列变化，称为： 。 2、DNA复制过程中发生的DNA变化称为 。 损伤的修复方式有 ; ; ; ; , 其中以 为主。;1、紫外线照射对DNA分子的损伤主要是: ( ) A.碱基替换； B.磷酸酯键断裂；  C.碱基丢失； D.形成共价连接的嘧啶二聚体。 ;2、比较真核生物与原核生物的DNA复制,二 者的相同之处是： ( ) A.引物长度较短； B.合成方向是5‘→3’； C.冈崎片段长度短； D.有多个复制起始点； E.DNA复制的速度较慢 (50dNTP/s).;3、着色性干皮病是人类的一种遗传性皮肤病,患 者皮肤经阳光照射后易发展为皮肤癌,该病的分子机理是：( ) A. 细胞膜通透性缺陷引起迅速失水;B. 在阳光下使温度敏感性转移酶类失活;C. 因紫外线照射诱导了有毒力的前病毒;D. 细胞不能合成类胡萝卜素型化合物;E. DNA修复系统有缺陷。;6.1 同源重组 6.1.1 同源重组的分子模型 6.1.2 异源双链与基因转换 6.1.3 细菌基因转移与重组 6.1.3.1 细菌的接合作用 6.1.3.2 遗传转化 6.1.3.3 细菌的转导 6.1.3.4 细菌的细胞融合 6.2 DNA重组技术 6.3 特异位点重组 6.3.1λ噬菌体DNA整合与 切除 6.3.2 细菌的特异位点重组;重组的概念： DNA分子内或间发生遗传信息的重新组合，称遗传重组（染色体水平）或基因重排(分子水平)。重组产物称为重组DNA (recombinant DNA)。 DNA重组对生物进化起关键作用。进化以不断产生可遗传的变异为基础，首先是突变和重组，由此产生遗传变异，然后才有遗传漂变和自然选择，才有生物进化。 重组的意义： 能迅速增加群体遗传多样性，使有利与不利突变分开，通过优化组合积累有用的遗传信息。 重组参与许多重要生物学过程，为DNA损伤或复制障碍提供修复机制。 某些生物的基因表达受到重组调节。;同源重组及其分子模型 概念：由两条同源区DNA分子通过配对、链断裂和再连接，产生片段间交换的过程。 Holliday 模型（能解释同源重组现象） 四个关键步骤： ①两个同源染色体DNA相互靠近并排列整齐； ②在同一部位两条单链断裂，引发重组； ③ 断裂的单链游离端彼此交换，每条链与另一对应链连接，形成Holliday中间体; ④ 分支迁移产生异源双链。两分子间交点沿DNA移动，方向任意。; ①两个同源染色体DNA排列整齐； ②两分子同一部位两个单链断裂，引发重组； ③断裂后形成单链3‘游离端，后者侵入到双链DNA内，寻找同源区域并配对结合，产生短的链置换区； ④断裂单链游离端彼此交换，每条链与另一对应链连接，形成Holliday中间体;⑤通过RuvA和RuvB引发分支迁移，产生异源双链DNA； ⑥通过RuvC形成拆分口，将四链DNA复合体按不同方向拆分，形成片段重组体和拼接重组体。;Holliday中间体通过分支移动产生异源双链DNA。异构化后通过不同切割方式产生不同重组分子： 如果切开的链并非原来断裂的链，重组体异源双链区的两侧来自不同亲本DNA，称拼接重组体（左），但如切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体含一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA，称片段重组体（右） ;13;同源重组的过程很精确，一个核苷酸的差错都会造成基因失活。 同源重组的分子基础是DNA链间配对，通过碱基配对才能找到正确的位置进行链交换。 实验表明，两个DNA分子必需具有75 bp以上的同源区才能发生同源重组，小于此数值时将显著降低重组率。;同源重组的酶学分子基础： RecBCD途径： 起始于对重组DNA分子中的一条双链DNA进行双链切断。 RecBCD蛋白(RecB、RecC和RecD基因的产物)结合到DNA双链断裂位点，并利用RecBCD蛋白本身具有的DNA解旋酶活性，向具有5-GCTGGTGG-3