薄荷组织培养实验报告.docx

薄荷组织培养实验报告 　　薄荷组织培养条件的选择　　摘要：考察了消毒方式、外植体部位、培养基配方等因素对薄荷组织培养的影响。结果表明，外植体先用体积分数７０％的乙醇处理３０ｓ后，再用１ｍｇ／ＬＨｇＣｌ２+2滴吐温８０浸泡一定时间，消毒效果好于40ｍｇ／Ｌ的漂白粉处理，适宜的ＨｇＣｌ２消毒时间分别为茎段、叶片、叶柄和已萌发的芽１２ｍｉｎ；末萌发的芽１０ｍｉｎ。茎段的不定芽诱导率和不定芽生长情况好于其他外植体。在薄荷旺盛生长期采集半木质化的茎段作为外植体进行诱导培养，不定芽萌芽早而且生长速度快。ＭＳ＋０．５0ｍｇ／ＬＢＡ＋０．１0ｍｇ／ＬＮＡＡ是适合外植体不定芽诱导的培养基配方。　　关键词：薄荷；外植体；组织培养　　TheＯｐｔｉｍｉｚationofＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆＭｉｎｔＥｘｐｌａｎｔｓ　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓ，ｅｘｐｌａｎｔｍａｔｅｒｉａｌ，ｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｆｏｒｍｕｌａｏｎｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｏｆｍｉｎｔｗａｓｓｔｕｄiｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｆｔｅｒｅｘｐｌａｎｔｓｂｅｉｎｇｉｍｍｅｒｓｅｄｉｎ７０％ｅｔｈａｎｏｌ，1mg/LＨｇＣｌ２＋Tｗｅｅｎ８０ｈａｄｂｅｔｔｅｒｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｔｈａｎ40mg/Lｂｌｅａｃｈｉｎｇｐｏｗｅｒ．ＴｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｉｍｅｏｆＨｇＣｌ２forｓｔｅａｍ，ｌｅａｆ，ｌｅａｆｓｔａｌｋandｇｅｍｉｎａｔｅｄｂｕｓｓｈｏｕｌｄｂｅ１２ｍｉｎ；10minforsｔｅａｍ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｓｔｅａｍｃｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎｔｈｅｖｉｇｏｒｏｕｓｇｒｏｗｔｈｐｅｒｉｏｄｏｆｍｉｎｔａｓｅｘｐｌａｎｔｓｈａｄｈｉｇｈｅｒｉｎｄｕｃｉｎｇｒａｔｅｔｈａｎｏｔｈｅｒｅｘｐｌａｎｔｓ．ＭＳ＋０．５0ｍｇ／ＬＢＡ＋０．１0ｍｇ／ＬＮＡＡｗａｓｔｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｍｅｄｉｕｍｆｏｒbudsinductionofｍｉｎｔexplants．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｉｎｔ；ｅｘｐｌａｎｔ；ｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ　　薄荷为唇形科草本植物，中医学上以薄荷全草入药，其性凉、味辛，具有疏散风热、清利头目、理气解郁之功效，主治外感发热、风湿初起、头痛目赤、咽喉肿痛、皮肤p试验于２０１０年３月至２０１１年２月在阜阳师范学院生物技术应用研究所生物　　薄荷茎尖组织培养技术总结报告.　　茎尖培养　　1材料选取　　每年6月份盛花期,在薄荷田中利用目测,采用手搓叶片鼻闻的方式选取,生长健壮,无病虫害,香味浓郁,叶片肥厚有本品种特征特性的优良单株,连株拔取,栽入花盆中,作为取材的母株.　　2材料处理　　待母株成活后,搬入热疗室进行处理,在38℃下间歇处理38小时,然后移出热疗室,在温室中缓苗7天,然后去嫩头,放入容器中,用清水清洗数次再用新洁尔灭浸泡13min.后拿入无菌室中,用70%乙醇消毒3s,升汞消毒8min在超净工作台上,挑取大小茎尖接种于培养基上,　　3配方设计及培养基配制　　茎尖分化培养基采用MS+/l+/l+琼脂/l+白糖30g/l,　　首先配好母液,再将琼脂放入蒸馏水中溶化后,加入母液,加入糖,充分搅拌好后,定容到1000ml再调节ph值到后,就可以分装培养基了.将培养基分倒到培养瓶中,扎好瓶口,放入高压锅中灭菌30min,拿出冷凉,培养基就制备好了.　　4培养条件　　将接好种的培养基放在培养室中培养,光照度XXlx,温度2516h/d光照,培养大约10-20天.转到MS培养基中　　5培养过程中的问题　　⑴玻璃化问题　　在培养过程中,可以采取固体和液体培养对照培养,一套培养采用滤纸桥培养,将茎尖放在棉花上培养.液体培养过程中易形成玻璃化苗,玻化苗的形成可用调节培养基的NH4+离子浓度来避免,另外,可用调节ph及调节培养温度来做调节。　　⑵茎尖大小问题　　培养过程中,采用大小茎尖培养,过大过小均不好,过大不易脱去病毒,过小易于死亡,所以茎尖大小采用大小的茎尖.　　二茎段快繁　　1茎段快繁采用一叶一芽方式,剪切横放于培养基中,培养基采用MS或者1/2MS,3/4MS均可,如果是切段快繁,可以采用1/2MS+/l不仅生长势旺,而且生长迅速.　　2茎段快繁每15天即可进行一次,每瓶放置7株,选择一瓶可繁殖8瓶,繁殖倍率为56倍.　　3茎段快繁可以结合生根阶段进行,驯化基质要求排水良好,疏松透气,可以采用蛭石珍珠岩,培养土均可.当薄荷苗生根后,苗高8cm左右即可炼苗.炼苗时打开瓶口,小心的用镊子掏出来,放于水中洗净根部琼脂,然后再用多菌灵浸泡一下,载于基质中,基质栽培前用高锰酸钾消毒杀死病菌,灾后盖上塑料薄膜保