分子荧光分光光度法.PPT

?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? * * ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? * * 仪器分析 供药学类、中药学类、制药工程及相关专业使用 全国普通高等中医药院校药学类专业“十三五”规划教材（第二轮规划教材） 第四章分子荧光分光光度法 目录 第一节 基本原理 第二节 荧光强度的影响因素 第三节 荧光光谱仪 第四节 定性和定量分析方法 第五节 荧光法的应用和新技术简介 物质可选择吸收一定波长的光辐射从基态跃迁到激发态，激发态也可以选择发射一定波长的光辐射返回到基态。 分子荧光分光光度法 物质吸收光辐射被激发后，再发射出光辐射返回基态的现象称为光致发光，最常见的光致发光有荧光和磷光。 根据产生荧光的物质粒子不同，荧光可分为原子荧光和分子荧光。 分子荧光分光光度法 利用物质分子荧光的特征和强度进行定性定量分析的方法称为分子荧光分光光度法—简称荧光分析法。 分子荧光分析的特点 1. 灵敏度高(检测限达10-10 g/ml，比UV-dis高10~1000倍) 2. 选择性好(干扰小) 3. 试样量少和方法简单 弱点：是它的应用范围小 分子荧光分光光度法 第一节 基本原理 分子荧光的产生 分子的电子能级 分子荧光的产生 激发光谱和荧光光谱 激发光谱 荧光光谱 荧光光谱的特征 分子荧光是一种光致发光，应包含分子激发(活化)和去激发(去活化)两个过程。 分子荧光的产生 S1 S2 S0 单重态 T1 T2 三重态 三重态: ①顺磁性 ②能级低 ③寿命长 分子的电子能级 分子荧光的产生 S1 S2 S0 振动弛豫 内转换 荧光发射 辐射跃迁——发光 非辐射跃迁—发热 外转换 分子荧光的产生 磷光发射 外转换 猝灭/熄灭 系间跨越 分子荧光的产生 荧光发射 指能量由处于S1的最低振动能级以辐射跃迁形式回到So的各振动能级的过程。 激发光谱和荧光光谱 荧光物质分子具有两个特征光谱： 荧光激发光谱 —激发光谱 荧光发射光谱 —荧光光谱 形状与吸收光谱相似 固定荧光的测定波长，不断改变激发波长，测量得到荧光强度(F)与激发光波长(λ)的关系曲线。 激发光谱 固定激发光波长和强度不变，记录得到荧光强度(F)与发射荧光波长(λ)的关系曲线。 荧光光谱 荧光光谱的特征 2)只有一个发射带, 形状与激发波长无关 1)荧光光谱的斯托克斯位移 3)荧光光谱和激发光谱呈镜像对称关系。 激发光谱和荧光光谱可用来鉴别荧光物质，也是定量分析时选择测定波长的依据。 荧光光谱的特征 ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? * * ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? * *