分子生物学-基因治疗.pptVIP

基因治疗 生化学院遗传教研室 阿 周 存 一、基因治疗的概念 二、基因治疗类型和途径 三、基因治疗的策略 四、基因治疗的方法 （一）体细胞的基因治疗方法 五、基因治疗的现状 1、一些单基因病的治疗 严重复合免疫缺陷症（ADA综合症）、血友病B、囊性纤维化（CF），苯丙酮尿症等 2、 Bata-地中海贫血病 别醇嘌呤重新开放r基因 3、多基因病心血管疾病，糖尿病、神经系统疾病等 4、肿瘤 5、其它疾病：HIV 六、基因治疗的问题、前景 问题： 1、 稳定性 2、安全性 3、导入基因的高效表达 4、免疫性 5、伦理问题 前景：十分有潜力的技术，有深远的意义 “基因治疗作为一项新的治疗技术，将不只限于遗传病和肿瘤的治疗，在可见的将来，它将是临床上多种疾病可选择的治疗方法。” 遗传病的常规治疗 （一）外科治疗 矫正畸形、组织和器官移植 （二）内科治疗 用药物及饮食治疗 1、禁其所忌 酶缺乏不能对底物进行正常代谢 的遗传病。 2、去其所余 酶缺乏使体内贮存过多的“毒物” 所致的遗传病 促排泄剂或螯合剂 、换血或血浆过滤等 3、补其不足 由于基因缺陷使体内缺乏某种酶和蛋白质而导致功能丧失的遗传病。 目的基因的制备方法 1、从基因组中分离 2、化学合成 3、用mRNA逆转录合成cDNA 4、从基因文库中筛选 5、PCR合成 受体细胞的选择 选择受体细胞的原则： 1、易于从人体分离又便于输回体内 2、易于接受外源的遗传物质 3、能够分裂，生命周期长 4、患病的器官或部位。 常用的受体细胞：骨髓干细胞 皮肤纤纬细胞 血管内皮细胞 肝细胞 淋巴细胞 治疗基因的转移方法 逆转录介导基因转移的优缺点 优点： 1、能高效率的感染宿主细胞（100%） 2、其宿主范围广泛，包括来自不同种的生物和细胞类型 3、被整合的基因在宿主基因组中稳定表达 4、用复制缺陷的重组逆转录病毒感染，毒性小 缺点： 1、只能感染分裂细胞 2、其外源DNA的容量太小 3、安全性问题（激活癌基因的潜在性） 腺病毒介导基因转移的优缺点 优点： 1、具有较广的宿主范围，能感染除造血细胞以外的几乎所有细胞 2、可以感染分裂及非分裂细胞 3、能高效地感染宿主细胞 4、外源基因容量大 5、安全性较高（不引起癌基因激活） 缺点：1、技术上需进一步改进 2、不整合到人类基因组 腺病毒是基因治疗载体的发展方向。 反义技术 反义技术（antisense technology)也称反义寡核 苷酸,是指利用人工合成的反义RNA或反义DNA来阻 断基因的转录或翻译，控制细胞生长的中间阶段， 使基因不能转录或翻译，因而不能合成蛋白质，以 达到治疗某中疾病的目的。 正常细胞(无细胞毒性) RNAi in gene therapy 基因治疗的现状-1 基因治疗的现状-2 Hemophilia B,FIX function reduced, X-linked 转录阻断 反基因技术示意图 胞嘧啶脱氨酶基因 erbB-2启动子 5-FC 5-FC 5-FU(细胞毒性) 肿瘤细胞 肿瘤特异性高表达因子 药物靶向治疗肿瘤 细胞死亡 RNA干扰（ RNA interference RNAi ) 2003年10大科学进展--第四 (Science) 正常生物体内一些小的双链RNA可以抑制特定基因表达的一种现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的小双链RNA (double stranded RNA，dsRNA)时，可以通过促使该mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因的表达，从而导致基因表达沉默的现象，这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing，