紫甘蓝中花青素提取实验报告.docVIP

紫甘蓝中花青素的提取 （安徽农业大学 12青年农场主班） 花青素具有很强的抗氧化作用，具有清除体内自由基、过敏、保护胃粘膜等多种功能，引起了国内外学者广泛关注。目前抗变异、抗肿瘤、抗，对花青素的研究主要集中于花青素的提取、分离纯化、热稳定性、抗氧化性及其生理功能等方面。 实验原理 紫甘蓝花青素或花色素属于黄酮类化合物，极性较高，可溶于水或甲醇乙醇等有机溶剂中。根据相似相溶的原则，本实验选用乙醇作为紫甘蓝花色素的浸提剂，采用大孔吸附树脂法分离提纯。大孔吸附树脂具有吸附性能和分子筛的作用，使相对分子质量和吸附能力不同的混合物的不同成分得到分离。紫甘蓝叶片与60%乙醇混合在组织捣碎机中破坏紫甘蓝细胞，使花色素尽可能多的溶解。为了防止花色素的降解以提高其溶出率，可在其中加入1%盐酸。八层纱布过滤后，留一小烧杯备用，剩余的用大孔树脂除杂，加入200ml 15%的乙醇溶液除去其他可溶性杂质，让树脂吸附花色素，再用60%乙醇洗脱，解析得到乙醇和花色素的混合液。将过柱的溶液以HCl：混合液=1:4的比例混合至烧杯中，在90。C的水浴锅中水解一小时，以破坏花色素的糖苷键，使花色素均以花青素的形式存在。此时，用20ml纯水除杂，用无水乙醇洗脱，得到较为单一的花青素与乙醇混合液。在旋转蒸发仪上蒸干。 材料、药品与仪器 新鲜紫甘蓝 15%乙醇、60%乙醇+1%HCl混合液、弄HCl、无水乙醇、AB-8打孔吸附树脂 电子天平、组织捣碎机、交换柱、玻璃棒、50ml量筒漏斗、烧杯、圆底烧瓶、纱布、比色皿、分光光度计、旋转蒸发仪 实验步骤 配制60%+1%HCl混合液与15%乙醇溶液备用 称取100.0g新鲜紫甘蓝叶片，量取60%+1%HCl混合液300ml（浸提剂），同时放入组织捣碎机中捣碎，浸提 所得固液混合物用8层纱布过滤，取一点滤液备用，剩余滤液1：5加水稀释得色素原液 将备用滤液再用滤纸过滤，用浸提剂做空白，测定其对520nm光的吸光度，并作标准曲线。 装柱上样，相交换柱加入大孔吸附树脂，向其中加入色素原液分离色素，然后加入15%乙醇除杂，最后加入60%乙醇洗脱得到花青素+花色素苷+乙醇混合液43.4ml 按盐酸：混合液=1:4的比例将混合液与盐酸混合，90。C水浴加热一小时，得到花青素与乙醇混合液 用无水乙醇洗脱，转移至圆底烧瓶，置于旋转蒸发仪上蒸干，干重为0.1g 实验结果 花青素含量标准曲线为 紫甘蓝捣碎榨汁后得到深紫色溶液，过滤静置稀释测得OD值为0.823由曲线可得到花青素含量为0.507g/L。干重花青素为0.1g，得率为0.1% 纯化率=实测干重/理论干重=0.1/0.507×0.3=66.2%。