草鱼PKZZα基因的克隆及表达纯化——大学生物系毕业论文.doc

密级： 保密★一年 NANCHANG 学 士 学 位 论 文 THESIS OF BACHELOR 题 目 草鱼PKZ Zα基因的克隆及表达纯化 学 院：生命科学与食品工程学院 系 生物系 专业班级： 生物工程072班 南 昌 大 学 学士学位论文原创性申明 本人郑重申明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本申明的法律后果由本人承担。 作者签名： 日期： 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密□，在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密□。 （请在以上相应方框内打“√”） 作者签名： 日期： 导师签名： 日期： 摘要 草鱼PKZ Zα基因的克隆及表达纯化 专 业：生物工程 学 号：5602207053 学生姓名：胡乐华 指导教师：范丽华 摘要 PKR是由干扰素诱导产生的、依赖双链RNA(dsRNA)激活的蛋白激酶，鲫鱼类PKR蛋白是第一个报道的非哺乳类PKR同源物，其鱼类干扰素系统中含Z-DNA结合域故称为PKZ。 为了得到草鱼PKZ Za基因及PKZ，由于草鱼CiPKZ基因序列与鲫鱼CaPKZ的基因序列具有极高的同源性，本文根据已知的鲫鱼CaPKZ全长cDNA序列，设计引物，经过PCR得到了草鱼PKZ基因，在将目的基因连接到pET-32a载体，导入大肠杆菌，原核表达、纯化后得到PKZ。 由于在酸性条件下，考马斯亮蓝G-250和蛋白质结合产生特殊的蓝色，最大吸收波长在595 nm处。最后通过考马斯亮蓝法测定该蛋白质的浓度为0.97mg/ml。 关键词：PKZ； 鱼类干扰素； 引物设计；PCR；草鱼；原核表达；考马斯亮法；Za Abstract Abstract PKR is an dsRNA-dependent protein kinase that is induced by interferon treatment.A fish PKR-like gene,named CaPKR-like,was the first identified fish gene most similar to mammalian PKRs. The interferon system of fish containing Z-DNA binding domain is known as the PKZ. Because the sequence of grass carp CiPKZ gene and the gene sequence of crucian carp CaPKZ gene is highly homologous. According to the known full-length cDNA sequences of carp CaPKZ. Primers, After PCR, the grass carp PKZ genes, In the target gene connected to the pET-32a vector, Into E. Coli, Expression, purification by PKZ. As the acidic conditions, Bradford G-250 and protein combine to produce a special blue, The maximum absorption wavelength at 595 nm, Finally, the Bradford method of protein concentration of 0.9