昆虫细胞培养手册.pdfVIP

TECON TECHNOLOGY CENTER NOVA LIU 昆虫细胞系的生长和维持 细胞系 简介： 本手册包括Sf9、Sf21和H5昆虫细胞以及提供相关昆虫细胞生长和维持的一般信息。 Sf9、Sf21和H5细胞系适于用杆状病毒或其他昆虫表达系统表达重组蛋白。 运输与储存： 运输：置于干冰上。 储存和传代：置于液氮储存。收到细胞即可开始，详见14页。 细胞系比较： 下面的表格总结了Invitrogen细胞系一般特征。订购信息见下页。 细胞 倍增时间 细胞外观 初始培养基 规则的带有颗粒球 TNM-FH Sf9 72h 形。贴壁紧。 不同大小带有颗粒 TNM-FH Sf21 24h 球形。贴壁紧。 不同大小带有颗粒 Express Five SFM H5 18h 球形。贴壁松。 重要事项： Invitrogen（生命技术部分）通过RT-PCR证实H5细胞藏匿有内生的野田病毒。在一 定条件下，H5产生野田病毒粒子。如此产生的病毒粒子未表现出对内原蛋白表达的不利 的影响，或着在限制使用证书66号下已延伸和提供对H5细胞其它研究应用（见35页）。 更多信息请联系技术支持。 用途： 仅供研究使用。禁止用于动物或人的疾病治疗和诊断。 Sf9和Sf21细胞系： 来源：Sf9（货号B825-01）和Sf21（货号B821-01）细胞系是传统的用于杆状病毒表达 的细胞系，源于美国农业部昆虫病理实验室。此细胞系适用于InsectSelect系统。这两 株细胞衍生于IPLBSF-21细胞系，来源于秋蝇蠕虫（草地夜蛾）蛹的卵巢组织。 特征：Sf9和Sf21有下列共同特征：易于形成单层和悬浮培养、适用无血清培养基。 大小不同：Sf9细胞系克隆分离于IPLBSF21-AE(Sf21)。体积较小大小规则的使其易于形 成单层和铺培养板。Sf21在大小和形成单层以及铺板规则上有一些不同。 用途：两者都适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。如果你是第 一次使用杆状病毒，你会发现Sf9细胞易于从斑块中分离。在一些结构上Sf21细胞可能 比Sf9细胞表达蛋白量高。 H5细胞系： 来源：H5细胞系源于博伊斯汤普森研究所对植物的研究，伊萨卡、纽约和源于白菜尺蠖 卵巢细胞，粉纹夜蛾。 特性：此细胞系有如下特性: - 1 - TECON TECHNOLOGY CENTER NOVA LIU ●倍增时间小于24h； ●适于贴壁培养，但易形成不整齐的单层，导致空斑鉴别困难； ●适于悬浮培养和无血清培养； ●提供 5-10个折叠（针对选择的蛋白）分泌表达量比 Sf9 细胞高。 用途：H5 细胞表达重组病毒性能优越。也经常用于转染和空斑纯化；然而，如果重组 体不是蓝色分离重组的空斑就比较困难。 昆虫表达系统： 大量从Invitrogen获得的表达系统在Sf9、Sf21或H5昆虫细胞中能便利的表达重组 蛋白。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统适于用杆状病毒来表达重组蛋白，同时 InsectSelect适于用无细胞溶解素的系