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第 34卷 第 1期 光 学 学 报 Vo1.34,No.1
2014年 1月 ACTA OPTICA SINICA January,2014
多重定量 PCR系统中多色荧光检测和
光谱串扰校正方法
臧留琴 张镇西 苗宝刚 彭年才 李 政
/西安交通大学生命学院生物医学信息工程教育部重点实验室,陕西 西安 710049、
\ 西安交通大学机械学院机械制造系统工程国家重点实验室,陕西 西安 710049 /
摘要 多色荧光的激发检测光路是多重定量聚合酶链式反应 (PCR)系统的核心组成部分。根据系统对荧光激发
的均一性、荧光检测的时间和灵敏度需求,提出一种基于磁光开关和光 电倍增管 (PMT)的多色荧光激发检测光路。
通过四色LED单独激发和PMT检测来提高灵敏度 ;利用磁光效应实现光路的电控切换,配合一维扫描机构和滤
光片切换装置 ,完成 96孔标准 PCR板 的四色荧光扫描。该设计避免了多色荧光光路 的系统串扰 。由于荧光染料
本身光谱特性产生的荧光光谱串扰是通过标准迭代的四维聚类分析算法计算串扰矩阵,并通过 4种常用染料的实
验研究 ,对所建荧光检测系统进行荧光光谱 串扰评估 。
关键词 光谱学 f多重定量;多色荧光检测;光谱串扰校正;磁光开关
中图分类号 0439 文献标识码 A doi:10.3788/AOS201434.O117002
MulticolorFluorescenceDetectionintheMultiplexQuantitativePCR
System andSpectraCrosstalkCorrectionMethod
ZangLiuqin ZhangZhenxi MiaoBaogang PengNiancai。 LiZheng
KeyLaboratoryofBiomedicalInformationEngineering,MinistryofEducation,SchoolofLifeScience
andTechnology,XianJiaotongUniversity,Xian,Shaanxi710049,China
StateKeyLaboratoryfo ManufacturingSystem Engineering,SchoolofMechanicalEngineering,
Xi0咒JiaotongUniversity,Xian,Shaanxi710049,China
Abstract Opticaldesignformulticolorfluorescencedetectionisthecorepartofmultiplexquantitativepolymerase
chainreaction (PCR) system.According to thesystem requirementsforexcitation uniform ,detection timeand
sensitivity,anopticalsystem ispresented,whichisbasedonmagneto—opticalswitchandphotomultipliertube (PMT)
detector.FourLEDsexcitationunitandPMT detectionunitareadoptedto improvesystem sensitivity.Electronic
opticalswitchcombinedwiththeone--dimensionalscanningmechanism andfiltertoimplementfour-·colorfluorescence
scanningon a 96-wellstandard PCR
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