黄瓜叶片质膜水通道蛋白基因的表达分析与克隆-园艺专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 独 创 性 声 明 本人声明，所呈交的学位论文，在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己 撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发 表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材 料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严 重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 论文使用授权的说明 本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件， 允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制 手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。□ 不保密, 本学位论文属于不保密。 □ （请在方框内打“√”） 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 指导教师亲笔签名： 日 期： 摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘要 干旱是一种普遍存在的自然灾害，它不仅抑制作物的生长，而且也严重影响了作 物的产量和品质。黄瓜（Cucumis sativus L.）作为我国重要的蔬菜作物，在我国国民 经济中占有非常重要的地位。但是，由于黄瓜对干旱胁迫比较敏感，当土壤含水量低 于 70%即受到干旱胁迫。因此，利用基因工程手段培育抗旱黄瓜品种具有非常重要的 意义。 水通道蛋白是植物水分跨膜运输的主要通道。尽管干旱和水通道蛋白之间的联系 已经有过相关的报道，但其准确机制目前仍旧不明晰。本研究首先通过构建系统进化 树，确定了与拟南芥响应干旱胁迫 PIP（质膜水通道蛋白）同源性较高的 8 个黄瓜 PIP， 然后采用津优 1 号黄瓜品种作为试验材料，通过在营养液中添加 PEG6000 模拟干旱 胁迫，用实时荧光定量 PCR 来研究耐旱和黄瓜水通道蛋白基因表达之间的关系。并 通过 RT-PCR 方法从黄瓜中克隆出水通道蛋白 Csa019689 基因，并构建了真核表达载 体 pCAMBIA-Csa019689，并转化拟南芥，获得了拟南芥种子。为进一步开展黄瓜 PIP 在植株中抗旱方面影响以及调控机理奠定了基础。主要研究如下： （1）通过生物信息学分析，明确了与拟南芥干旱胁迫同源的 8 个黄瓜 PIP 基因。 （2）通过添加 PEG6000 模拟干旱胁迫，设置 5%和 10%两个浓度的处理，以正常 营养液培养的植株为对照，在 12h、24h、36h 三个时间点采集样品叶片。对黄瓜 Csa011928、Csa011929、 Csa015178、Csa020563、Csa012726、Csa019687、Csa019688、 Csa019689 基因进行的荧光定量分析结果表明，Csa019688、Csa019689、Csa011928、 Csa011929 、 Csa020563 五 个 基 因的 表 达变化 显 著 ， 而 Csa012726 、 Csa019687 、 Csa015178 三个基因的表达变化不显著。说明 PIP 家族基因受干旱诱导具有表达差异 性并能够对外界环境的胁迫产生响应。 （3）克隆了 1 个黄瓜质膜水通道蛋白基因，数据库登录号为 Csa019689，属于 PIP1-4。Csa019689 基因 cDNA 全长为 1624 bp，编码 292 个氨基酸。 （4）构建了 Csa019689 基因的表达载体，命名为 pCAMBIA-Csa019689，通过冻 融法将构建的植物表达载体转化到农杆菌 GV3101 中，并通过农杆菌介导转化到拟南 芥中。 关键词：黄瓜，水通道蛋白，基因克隆，表达分析，生物信息学分析 I AB ABSTRACT ABSTRACT Drought is a widespread phenomenon of natural disasters. It not only inhibits the growth of crops, but also seriously affects the crops yield and quality. Cucumis sativus L., as an important vegetable crop in our country, plays an important role in Chinese agricultural economy. However, cucumber is under drought stress when the soil moisture content is less than 70%, Because of the cucumber being more sensitive to drought