胡萝卜的组织培养.docVIP

胡萝卜的组织培养 组织培养 准备 器具准备： 高压蒸汽灭菌锅： 培养基，接种工具，蒸馏水的消毒。 手持喷雾器： 装70%的酒精，用于外植体，接种工具，操作人员的消毒。 超净工作台： 用于无菌操作。 设备：培养架，温度控制器，摇床，光照培养箱，烘干器，蒸馏水器，冰箱，电炉，天平，温度计，酸度计，显微镜，分注器，移液器，磁力搅拌器， 常用玻璃器具：量筒，培养皿，烧杯，50ml锥形瓶，容量瓶，广口瓶，滴管，移液管，试管，酒精灯，玻璃棒， 常用金属仪器：镊子，剪刀，解剖刀，解剖针，接种针，刀架 其他用品：滤纸，标签，消毒酒精棉球，封口用品 试剂：MS基本培养基 2,4-D：生长素类似物 NAA：生长素类似物 6-BA：细胞分裂素类似物 酒精（体积分数70%）：消毒 次氯酸钠（体积分数20%）：消毒 无菌水 2 .配制 类别 化合物 称取量/mg 扩大倍数 体积/mL 1L培养基的吸收量/mL 大量元素储备液 NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 33000 38000 8800 7400 3400 20 20 20 20 20 1000 50 微量元素储备液 KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O NaMoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 166 1240 4460 1720 50 5 5 200 200 200 200 200 200 200 1000 5 铁盐储备液 FeSO4·7H2O Na2·EDTA 5560 7460 200 200 1000 5 有机物储备液 肌醇 烟酸 维生素B6 维生素B1 甘氨酸 20000 100 100 20 400 200 200 200 200 200 1000 5 MS基本培养基配方：上述4种储备液+30g蔗糖+8g琼脂+蒸馏水定容至1000mL （pH5.6~5.8） 分别向MS基本培养基中加入植物激素：（pH5.6~5.8） 诱导愈伤组织形成培养基：MS+0.5mg/L 6-BA+0.125 mg/L2,4-D 诱导分化芽的培养基：MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/LNAA 诱导生根的培养基：MS+0.1 mg/L NAA 3.灭菌：灭菌后冷却置于常温下观察3天，检查灭菌是否彻底。 4.取材接种： a．将萝卜洗净削皮切段，擦手消毒。 b．在超净工作台上将萝卜用酒精消毒30秒，用无菌水清洗两到三次，用次氯酸钠溶液处理30min，用无菌水清洗两到三次。 c．用无菌滤纸吸取水分，在培养皿上用无菌刀将萝卜切成1cm厚的横切片，选取有形成层的部位，切取1cm2的小块。 d．将组织块接种到培养基上，封口。贴上标签，写明材料、日期、编号。 e．将培养基放在23-26°C的恒温箱培养。4天后观察材料污染情况，14天后，观察愈伤组织生长情况。 5观察记录：每天观察外植体的生长情况，记录愈伤组织的大小、质地、颜色等情况。 6转接，培养：培养一段时间后，将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基上，培养一段时间后，胡萝卜的愈伤组织就可以诱导出试管苗。 （二）露地栽培 1．培育壮苗:添加一定数量的生长延缓剂（如矮壮素、PP333）同时打开瓶盖，持续一周。 选用合适的培养基 转栽试管苗:洗去附着在根系上的培养基 移栽后的条件控制:保持空气湿度，遮挡强光，降低温度 栽培