课件：蛋白质的化学.ppt

层析的主要设备 3.密度梯度离心法 滴加样品 蔗糖密度梯度 蔗糖浓度 CsCl密度梯度离心 （三）根据电离性质不同的分离纯化方法 1.电泳法：带点质点在电场中向电荷相反的方向移动。 ①醋酸纤维膜电泳 ②聚丙烯酰胺凝胶电泳 ③等电聚焦电泳 ④免疫电泳 ⑤二维电泳 2.离子交换层析：离子交换纤维素、 离子交换凝胶、 大孔型离子交换树脂 等电聚焦电泳 2.离子交换层析分离蛋白质 蛋白质浓度 洗脱体积 带正电荷的蛋白质 带负电荷的蛋白质 收集样品的管 收集样品的管 带负电荷的蛋白质 蛋白质混合物 玻璃柱 带正电荷的蛋白质 带负电荷的蛋白质 带正电荷的蛋白质 收集样品的管 NaCl NaCl梯度 （五）利用配体的特异性亲和力的纯化方法 应用 分离纯化酶、 抗原、抗体 分离纯化核酸 研究酶的结构与功能 + 待纯化分子 配体 a. 理论依据：待纯化分子和配体间具有亲和性 + 基质 b. 活性基质与配体结合产生亲和吸附剂 + + 杂质 c. 待纯化分子与亲和吸附剂结合，与杂质分离 + d. 偶联复合物经解离后，得到纯的待纯化分子 基质 纤维素、聚丙烯酰胺凝胶、 sepharose、sephadex