扫描电镜制样.DOCVIP

扫描电镜常规制样方法 方法一：植物叶片单固定扫描电镜制样方法 取材 将叶子切成5-10mm长方形6-10片。 固定 放入2.5%戊二醛+2%多聚甲醛固定液中进行抽气（样品无气泡产生，全部沉于底部即可），固定12小时以上。 3．脱水 用乙醇逐级脱水30%→50%→70%→80%→90%乙醇，每20 分钟更换一次（70%以前放置4°C冰箱内）， 100%乙醇每20分钟一次，共5次（70%乙醇以后放置室温脱水）。 替换 将乙醇倒掉，换叔丁醇，每20分钟一次，共5次。第5次浸过样品即可，放置冰箱冷冻层（-20°C左右）30分钟或过夜。 干燥 用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。 粘台 将上下表皮分别粘在具有双面胶带的样品台上。 镀膜 用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。 观察并拍照 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。 注明：此方法适合植物根、茎样品 方法二：植物叶片单固定扫描电镜制样方法 .取材 将叶子切成5-10mm长方形6-10片。 2预固定 放入2.5%戊二醛+2%多聚甲醛固定液中进行抽气（样品无气泡产生，全部沉于底部即可），固定12小时以上。 冲洗 0.1M磷酸缓冲液进行冲洗3次，每40分钟一次。 4．双固定 用1%四氧化锇（OsO4）进行固定2.5-3小时。 5．冲冼 0.1M磷酸缓冲液进行冲洗3次，每5分钟一次。 6．脱水 用乙醇逐级脱水30%→50%→70%→80%→90%乙醇，每20 分钟更换一次（70%以前放置4°C冰箱内）， 100%乙醇每20分钟一次，共5次（70%乙醇以后放置室温脱水）。 替换 将乙醇倒掉，换叔丁醇，每20分钟一次，共5次。第5次浸过样品即可，放置冰箱冷冻层（-20°C左右）30分钟或过夜。 干燥 用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。 9．粘台 将上下表皮分别粘在具有双面胶带的样品台上。 10.镀膜 用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。 11. 观察并拍照 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。 注明：此方法也适合根、茎 注明：此方法适合植物根、茎样品 方法三：花粉扫描电镜直接观察制样方法 1. 将花粉直接粘在具有双面胶带的样品台上。 2.用JFC-1600离子溅射镀金膜约10nm。 3. 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。 注明：此方法适合植物花粉自身干燥，无分泌污染物。 方法四：花粉扫描电镜单固定制样方法 取材 将花粉拨到1.5ml离心管中。 固定 放入2.5%戊二醛+2%多聚甲醛固定，固定12小时以上。 冲洗 0.1M磷酸缓冲液进行冲洗3次，每40分钟一次。 4．脱水 用乙醇逐级脱水30%→50%→70%→80%→90%乙醇，每10 分钟更换一次（70%以前放置4°C冰箱内）， 100%乙醇每10分钟一次，共5次（70%乙醇以后放置室温脱水）。 替换 将乙醇倒掉，换叔丁醇，每10分钟一次，共5次。第5次浸过样品即可，放置冰箱冷冻层（-20°C左右）30分钟或过夜。 干燥 用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。 9．粘台 将花粉涂上双面胶带的样品台上。 10.镀膜 用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。 11. 观察并拍照 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。 注明：此方法适合植物花粉野外采集固定（FAA）样品 方法五：蜡叶标本花粉扫描电镜制样方法 将花粉或花药放至1.5ml离心管中，加入冰醋酸，浸泡12小时。 用镊子将花药全部捣碎，离心4分钟将上清液倒掉。 加入1：9（硫酸：醋酸酐），放置金属水浴100℃，5-15分钟（时间长短跟据花粉外壁污染轻重而定）。 再次离心倒掉上清液，加入纯水清洗三次以上，每次经过离心。 加乙醇30%，50%，70%，每级乙醇进行超声波5分钟，离心4分钟。 花粉直接滴台，自然干燥后，用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。 方法六：蜡叶标本种子扫描电镜制样方法 用95%乙醇直接清洗种子，用毛笔将种子外壁轻轻刷干净。 种子放在滤纸上自然干燥。 干燥后种子直接粘在双面胶带的样品台上。 用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。 注明：此方法适合干燥种子、昆虫。