酶在催化乳酸铵制备乳酸乙酯中的应用.docVIP

酶在催化乳酸镀制备乳酸乙酯中的应用 乳酸乙酯具冇无毒、溶解性好、易挥发及可生物降解等优点，町作为制药工业中制压片制润滑剂和某 些药品的中间体，还是常用的食晶香料和生产酒类食晶的重要原料，被J泛用于医药、农药和其他精 细化工品领域，是极具开发价值和应用前景的“绿色溶剂”。 FI前，以乳酸钱为原料合成乳酸乙酯的催化剂主要是酸催化剂.酸催化剂具有污染环境、腐蚀设 备等缺点.Walkup等采用CO；?促进乳酸钱的分解，增加了乳酸乙酯的产率，但对反应容器的耍求较高, 需要较高的压力（1-200大气压），而且COz与皿的分离比较用难.生物酶具有低能耗，反应条件温和, 专一性强等特点.目前未见有关酚催化乳酸彼合成乳酸乙酯的报道.木文以脂肪酶为催化剂，以乳 酸鞍及乙醇为原料合成乳酸乙酯，为乳酸乙酯的合成提供了新的途径. 1方法 1. 1乳酸乙酯的合成 将乳酸钱和乙醇按照一定比例加入50 iiiL的具塞锥形瓶中，再加入一定量的有机溶剂使反应物总 体积为10 mL,充分混合后加入-定质量的脂肪酶，在特定的温度和摇床转速下反应一定时间. 1. 2水解酶活的测定 参照赵天涛论文中水解酚活的测定方法，将毎克酶毎分钟催化产生lumol脂肪酸定义为一个活力 单位（umol / （g ? min））. 1. 3酶的稳定性 反应结束后，过滤分离脂肪酶和反应液，脂肪酶经叔丁醇冲洗加入到新鲜反应底物中进行下一次 的催化反应，反应条件不变. 1. 4乳酸乙酯的检测 采用SP-1000型气相色谱仪（PEG -20M,填充柱为2 mX 3 mm）测定乳酸乙酯,TCD检测器,配浙 江大学N2000双通道色谱工作站，柱箱温度为100°C、进样器170°C、检测室160°C、热丝180°C ,环 己刪为内标物. 1酶和溶剂的选择 表1不同脂肪酶在不同溶剂中对乳酸乙酯产率的影响 Tab. 1 Effect of different lipases on the yield of ethyl lactate in different solvents 产率/% 有机溶剂 Novozym435 CCL TLIM None-enzyme 叔丁醇 6.85 1- 1 1 氯仿 5」0 1 1 1 丙醐 1」8 1 1 1 乙睛 2.35 1 1 1 苯 3」9 1 1 V】 环己烷 } 1 1 1 无溶剂 1 1 1 1 反应条件： 钱醇摩尔比1 : 8, 底物总ft 0.8 g, 酶 50 mg, 有机溶剂5mL, 转速 150 r/min,时间 24 h. a：未检测 故选择Novozym 435作为催化剂，以叔丁醇为反应介质. 2底物配比对催化反应的影响 9821152 9 8 2 11 5 2 ? O .宀仝?宀.￡.介■今 、? 、? 、? 、? 、? 、? 、? 、? 択乳酸技）/〃（乙醇） 图I乳酸钱/乙醉摩尔比対乳酸乙酯产率的影响 Fig. 1 Effects of molar ratio of the substrates on the yield of ethy） lactate 反应条件：乳酸狡浓度0.3 moVL,酶浓33 g/mol, 60C, 150 r/min, 24 h 实验结果如图1所示.由图1可见，在反应体系中，随着乙醉添加量的增加，乳酸乙酯产率逐渐 增大，钱醇物质的量之比达到1： 24时，乳酸乙酯产率达到最大.山丁?酯化反应为可逆反应，随着乙 醇量的增加，平衡向正向移动，产率逐渐增加.但乙醇量太大，产率反而F降，这是山于过量加入乙 醇导致陋失活，造成乳酸乙酯产率降低.因此，选择镀醇物质的最之比为1： 24. 2?3底物浓度对催化反应的影响 图3乳酸彼浓度对乳酸乙酯产率的影响 Fig. 3 Fig. 3 反应条件：钱醇摩尔比I : 24,酶浓33g/mol, 60 °C, 150 r/min ? 24 h 山图3可以看出：随着乳酸钱浓度的增加，乳酸乙酯产率逐渐增大，当乳酸钱浓度为0. 2 mol / L 时，乳酸乙酯产率率到28. 58%,之后，随着乳酸镀浓度的增大，乳酸乙酯产率明显降低.可能的原因 是：1）随着乳酸桜浓度的增大，利丁反应正向进行，乳酸乙酯产率升高；2）过量的乳酸镀夺取了酶分 了表面的必需水，加速了酶的失活；3）乳酸镂浓度增人的同时，乙醇浓度也不断增加，增人了乙醇 对酶的失活作用，使乳酸乙酯产率下降.因此，选择乳酸钱浓度为0?2mol/L.实验结果如图3所示. 4温度对催化反应的影响 3#/弄24 3 #/弄 24 6 7550 55 60 65 70 75 r/r 图4反应温度对乳酸乙酯产率的影响 Fig. 4 Effect of temperature on the yield of ethyl lactate 反应条件：钱聊摩尔