《真核基因表达调控》-公开·课件.pptVIP

螺旋-环-螺旋（helix-loop-helix，HLH） 长约20个氨基酸，至少有两个α螺旋其间由短肽段形成的转角或环连接，两个这样的 motif 结构以二聚体形式相连，距离正好相当于DNA一个螺距（3.4nm）,两个α螺旋刚好分别嵌入DNA的大沟。 两条均含有亮氨酸残基的蛋白质通过疏水键结合成二聚体，二聚体的另一端的肽段富含碱性氨基酸残基（Lys、Arg），借其正电荷与DNA双螺旋链上带负电荷的磷酸基团结合。亮氨酸拉链蛋白在真核中广泛存在， ③亮氨酸拉链（leucine zipper,LZIP） 肽链上每隔6个氨基酸就有一个亮氨酸残基，结果就导致这些亮氨酸残基都在α螺旋的同一个方向出现。 亮氨酸拉链 转录因子的DNA结合结构域本身并不具有调控转录活性的功能，其转录活化功能是由另一种结构域，即转录激活结构域所作用的。 转录激活域通常是由30~100氨基酸残基组成，根据氨基酸组成的特点主要包括以下三种类型： 转录激活结构域 （transcription activating domain） ①酸性α-螺旋结构域 ②富含谷氨酰胺结构域 ③富含脯氨酸的结构域 ①酸性α-螺旋结构域 含有酸性氨基酸残基组成的保守序列，多呈带负电荷的疏水性α-螺旋。含有这种结构域的转录因子有酵母的GAL4和GCN4，哺乳动物细胞中的糖皮质激素受体以及AP1家族的Jun等。 对转录起始的特异诱导活性相对较低，可能与TFⅡ-D复合物中某个通用因子或RNA聚合酶Ⅱ作用发挥转录活化功能，并有稳定转录起始复合物的作用。 ②富含谷氨酰胺结构域 SPl是启动子GC盒的结合蛋白，除结合DNA的锌指结构以外，SP1共有4个参与转录活化的区域，其中最强的转录激活域很少有极性氨基酸而谷氨酰胺含量却达25％左右。酵母的HAP1、HAP2和哺乳动物细胞中的Oct-1、Oct-2、Jun、AP2以及血清应答因子(SRF)等都有同样的结构域。 ③富含脯氨酸的结构域 CTF家族的C末端与其转录激活功能有关，含有20%～30%的脯氨酸残基。脯氨酸的存在可防碍?-螺旋的形成。在Oct2、Jun、AP2、SRF等哺乳动物因子中也有富含脯氨酸的结构域。 基础转录因子的调控 基础转录因子是所有启动子起始RNA合成的必需因子，与RNA 聚合酶结合形成围绕在起始位点周围的复合物，决定转录的起始位点。 转录起始复合物TBP（TFⅡ-D）、TFⅡ-B和TFⅡ-F与RNA聚合酶Ⅱ可在启动子上形成最低限度的复合物，开始转录mRNA，随着TF Ⅱ-E和TFⅡ-H 的加入形成完整的转录复合物并转录出长链的RNA。加入TFⅡ-A可再进一步提高转录效率。 4. 反式作用因子对转录的调控 TBP: TATA-binding protein TAFS: TBP-associated factors RNA聚合酶Ⅱ的基本转录因子 促进TFⅡ-D的结合 120 TFⅡ-I 稳定TFⅡ-D的结合,活化TBP并释放TAF 12,19,35 TFⅡ-A 激酶活性,使RNA聚合酶Ⅱ的CTD磷酸化 62,89 TFⅡ-H ATP酶,参与调节TFⅡ-H的激酶活性 34,37 TFⅡ-E 大亚基-解旋酶; 小亚基-携带RNA聚合酶Ⅱ 30,74 TFⅡ-F 介导RNA聚合酶Ⅱ的结合,结合在起始位点处 33 TFⅡ-B 与TATA盒结合,协助TAFs的加入 30 TFⅡ-D(TBP) 功能 分子量(kD) 转录因子 RNA聚合酶Ⅱ启动子元件与TFⅡD、A、B、F、RNA 聚合酶Ⅱ、TFⅡE、H和TFⅡI等顺序结合，形成最基本的转录起始复合物。 一个启动子要达到足够的转录效率和具有特异性，要依靠上游启动子元件、增强子和应答元件等，这些元件由上游转录因子或诱导型因子所识别。 上游转录因子识别并特异地结合在上游顺式元件上，这种转录因子普遍存在，且活性不受调控，能作用于任何启动子上提高启动效率（相当于TFⅢA和TFⅢC），这是强启动子所必需的。 这些因子结合在上游元件上后并不直接作用于RNA聚合酶Ⅱ，而是作用于基础转录因子，再由基础转录因子作用于RNA聚合酶Ⅱ。在转录的启动中，蛋白质与蛋白质之间的相互作用具有和蛋白质与DNA之间的作用同等的重要性。 上游转录因子的调控 ①结合CAAT box的转录因子 CTF（CAAT box transcription factor）家族是能识别CAAT box的一组转录因子，它们是同一基因转录后由不同剪接方式形成的一组mRNA翻译产生的。CTF1的转录激活结构域富含脯氨酸。 与CAAT框结合的另一类因子是CP家族，其成员与不同基因的启动子中CAAT框的亲合力不同。例如，CP1与?-珠蛋白基因的CAAT框亲和力高，而CP2与?-血纤维蛋白原基因中的CAAT框亲和力高。 ②结合GC box的