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实验项目：薄层层析分离顺反偶氮苯 实验目的 1．了解薄层层析分离有机化合物的原理及应用范围； 2．掌握薄层的制备、点样、展开、显色的操作； 3．了解紫外灯检出斑点及常用的薄层展开系统、显色剂； 4．了解值Rf值的意义及计算。 实验内容 应用薄层层析分离顺反偶氮苯 1．制备薄层层析板 2．配制展开剂 3．检出斑点 4．计算Rf值 实验示意图 点样 薄层层析展开 实验用主要仪器设备、消耗品 仪器设备名称 规格 消耗品名称 规格 　尺 薄板 　载玻片 　层析缸 硅胶G 青岛海洋化工 AR 　 CMC 　0.5-1%浓度 　 点样管 0.3*100 　 环己烷 　AR 乙酸乙酯 　AR 　 偶氮苯 　AR 　 　 实验原理及原始计算数据、所应用的公式 薄层层析是六十年代发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。它兼具了柱色谱和纸色谱的优点，既可用于少量样品（0.01微克）的分离，也可用于 制备分离，应用极为广泛。 Rf值是衡量物质在薄层上分离及鉴定的一个数值，具有较大极性的化合物在薄层板上呈现较强吸附力，它们的Rf值较小，因此利用化合物极性不同，在不同展开剂上显示不同Rf值，可以达到分离。 Rf值彼此相差较远，说明物质分离较好。 Rf值=原点至斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离 =AO/BO 偶氮苯的光化异构体 偶氮苯最常见的形式是反式异构体，反式偶氮苯在光的照射下能吸收紫外光形成活化分子，活化分子失去能量会回到顺式或反式基态 实验数据记录 薄层板的制备： 薄层色谱用的吸附剂一般是氧化铝,硅胶,硅藻土,聚酰胺等,薄层板制作时，除吸附剂外，还添加一些另外物质。 硅胶H 即为纯硅胶 硅胶G 硅胶+石膏,适合于板上作记号 硅胶GF254 含石膏，可在254纳米紫外灯下观察荧光的物质 硅胶GF254+365 含石膏可在254、365纳米紫外灯下观察荧光的物质 粘合剂石膏(2CaSO4.H2O)还可用淀粉，羟甲基纤维素钠（CMC）代替，加 粘合剂的薄板叫硬板。 薄层板制作方法分干法，湿法两种。 以下为湿法制板： 称取2克硅胶于8毫升1%CMC溶液中，调成糊状，用研钵的杵在薄板上 涂布均匀，用手轻轻振动，使其成平整薄层，平铺在玻板上，空气下干燥，然后在110℃烘箱内活化0.5h。2克硅胶可铺8块载玻片。 2. 点样 待薄层干燥后，进行点样，先在薄板底线1-1.5厘米处画一条线，将待 分离样品溶于低沸点溶剂中配置1%左右的溶液，用毛细管点样，样品斑点要小，点样间距1-1.5厘米。 3. 展开： 配制的展开剂置于密闭层析缸中，展开剂用量约在缸底部1厘米高，将薄板轻轻放入，用上升法展开。 4. 显色： 待展开剂距上沿约1厘米处，取出薄板，待溶剂挥发，紫外灯下看萤光，或用显色剂显色。 5. 计算Rf值 实验结果计算及曲线 样品一为光照后的偶氮苯，由于光的激发使原来反式异构体有部分转成 顺式。 样品二黑纸包装的是未光照的偶氮苯。 结果： 样品一有二个斑点 样品二有一个斑点 1．顺式偶氮苯具有一定的偶极矩，极性较大，反式偶氮苯由于结构对称， 偶极矩为零，因此极性较小，Rf值较大。 2．薄层板的活性与含水量有关系，一般将硅胶板放在105-1100C的烘箱中活化30分钟，可达到 对实验结果和实验中某些现象的分析讨论 1．薄板涂布不匀，有气泡，致使分离不佳，在硅胶与CMC混合时要研磨， 清除气泡。 2．光照后的顺式斑点不明显，有时Rf值计算有误，可以在紫外灯下再观察。 3．如果分离别的无色的化合物，应该加显色剂。 4．点样时斑点尽可能小，以免在展开时造成扩散，分离不佳。 通过本试验，要求学生掌握不同色谱技术的特点，原理及其应用。 一般来讲： 1．薄层色谱应用简单，普及，应该牢固掌握，作为今后化学研究中不可 缺少的工具，并应用该技术来探索柱色谱分离的最佳条件。 2．柱色谱用于纯品制备，特别是较大量混合物的分离，结构鉴定，离不开柱色谱的应用。 3．气相色谱用于定量、定性分析，但对于加热易分解，不挥发性物质不 适用。 实验精确度 % 实验方法指示及注意事项 1．光异构化：0.1克反偶氮苯溶于5毫升无水苯中，将此溶液分为二个试管，置一试管在太阳光下照射一小时，照射要完全，使分离现象明显。另一试管用黑纸包好。 2．薄板制成后可以在105-1100 3．点样时要用开口平整的毛细管。 4．展开剂为 环己烷：乙酸乙酯 = 20：1。 环己烷：乙酸乙酯 = 20：1。