渗透化细胞转化生成苯乳酸的研究-食品与发酵工业.PDFVIP

渗透化细胞转化生成苯乳酸的研究‘ 沐万孟，刘凤丽，张涛，江波 (江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡。214122) 摘 要J么ffo妇fi““s sp．SK007乳酸脱氢酶是催化苯丙酮酸转化生产苯乳酸的关键酶。实验中研究了渗透化 剂对于L口“o阮fiZZ“5 sp．SK007乳酸脱氢酶表观酶活的影响．优化了细胞渗透化处理过程；研究了pH和温度对 于渗透细胞和粗酶液乳酸脱氢酶表观酶活及稳定性影响。优化了LnffD阮fiff“5sp．SK007渗透化细胞转化生产 苯乳酸的工艺。渗透化过程：以2％乙醚为渗透剂，渗透时间Zmin。渗透化温度30℃；渗透化细胞转化生产苯 乳酸工艺：苯丙酮酸底物浓度为5g／L，反应温度40℃，pH为6．O，转化时间为4h，PI。A的产量达到3．38g／L。 关键词L口ffo施“zZ“5 sp．SK007，乳酸脱氢酶，渗透化，苯乳酸 苯乳酸(phenyllacticacid)，也称p苯乳酸或3一中，反应底物及产物必须通过细胞壁和细胞膜进行运 苯基乳酸，是近年来发现的可由多种乳酸菌发酵生成 输，细胞的通透性对于反应过程及转化率具有较大的 的一种新型生物防腐剂…。它能够抑制多种食源性 影响。本文在前期工作的基础上，以苯丙酮酸为底 c’^e，．i以info￡i 致病菌，如大肠杆菌(B 0157：H7)、金物，利用表面活性剂改变细胞通透性，提高了苯乳酸 的生物转化效率。 黄色葡萄球菌(5fⅡ户^yzofocf“5Ⅱ“reMs)、单核细胞增 生李斯特菌(Lm已r妇柳。行ofyfog删Ps)等，特别是对引 1 材料与方法 起食物腐败的真菌包括产毒素的真菌有广谱的抑制 作用，已成为乳酸菌抗真菌能力的有效标志之 1．1菌种与培养条件 一[2～sl。 乳杆菌Lnffo沈fiZZ“5 sp．SK007菌株。保藏于江 前期研究工作中，本实验室从传统食品泡菜中筛 南大学食品科学与技术国家重点实验室阳】。由实验 选到1株产苯乳酸的新型乳杆菌L口以。施f班“5sp． 室从泡菜中筛选，16SrDNA序列鉴定为L口“o施fiZ— Z“5 SK007f6]。研究人员研究了苯乳酸合成代谢的途径，sp．，GeneBank登录号为DQ534529。 发现苯乳酸是苯丙氨酸代谢途径的一个分支，即苯丙 从生长良好的斜面挑取菌种至MRS培养基中 氨酸先经过苯丙氨酸转氨酶催化生成苯丙酮酸(转氨 步骤)，苯丙酮酸再经过脱氢酶加氢还原生成苯乳酸 培养基，30℃静止培养18h后冷冻离心(8000×g， 15 (加氢步骤)[73；并发现，转氨步骤是苯丙氨酸代谢生 min，4℃)，用50mmol／L 7．1)洗 Tris—HCl(pH 涤菌体2次，将菌体重悬于O．1mol／L 6．o的磷 成苯乳酸的限速步骤H]。首次建立了苯丙酮酸代替 pH 苯丙氨酸为底物，发酵生产苯乳酸的方法，该方法可 酸钠缓冲溶液中备用。 克服转氨限速步骤．一步转化生成苯乳酸，由原先的 1．2主要试剂与设备 o．55