人成骨细胞体外培养鉴定及护骨素表达-中国骨质疏松杂志.PDFVIP

中国骨质疏松杂志 2002年 11月第 8卷第 4期 ChinJOsteoporos，November2002，Vol8，No．4 283 · 论 著 · 人成骨细胞体外培养、鉴定及护骨素表达 的研究 苏欣 廖二元 罗湘杭 【摘要】 目的 用酶消化法从正常人松质骨中分离成骨细胞，进行体外培养和功能鉴定，观察 用 17 雌二醇(17 E2)和雌激素受体拮抗剂 ICI182780处理后 ，成骨细胞 中护骨素 (OPG)的表达变 化 。方法 用胰酶 一胶原酶消化法从正常人松质骨 中分离培养成骨细胞 ，I型胶原染色用 VanGie． son法 ，钙化结节用茜素红染色 ，用钙钴法显示成骨细胞 中碱性磷酸酶 的表达 ，骨钙素和 OPG基 因的 表达用 RT—PCR检测 ，OPG蛋 白用 WesternBlot检测 。结果 用酶消化法分离的人成骨细胞 ，在体外 培养时可维持合成 I型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素 ，并形成钙化结节等功能；体外培养 的人成骨细胞 表达 OPG，176．E2上调其表达 ，并能被雌激素受体拮抗剂 ICI182780阻断。结论 用酶消化法进行人 成骨细胞培养 ，方便易行 ，可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用；17 E2上调 OPG表达，而绝经 后雌激素缺乏时，OPG的表达相应减少 ，可能是骨质疏松的发病 因素之一 。 【关键词】 人成骨细胞； 酶消化法； 鉴定 ； 护骨素 ／nv／trostudyofexpressionof osteoprotegerininhumanosteoblasts SU ，1．LIAOEr’yll,atI，LUOXiang· 7m，lg．Instituteof 蝴 Metabolism，TheSecondHospitalofXiangyaMedicalCollege，Central-South Universtiy，Changsha 410011，China 【Al~-traet】 OMective Tocultureandidentifythefunctionsofhumna osteoblasts(HOB) n／vtiro，the eeHswereharvestedfrom htetrabecularboneofnormalsubjects．Thenhteexpressionofosteoprotegerin(OPG)in hteHOBeeHstreatedwiht 17~-estradiolnadantiestrogenreagentICI182780WaSinvestigated．Methods The HOBswereisolatde from hte~ ularbonebytrypsinnadcollagenaos digestion．TypeIeoHagen，mineralized nodesnadhteexpressionofalkalinephosphatasewerestudiedby Vna Gieosn’Sstaining，alizarinredstainingnad modifide Gomorimethodrespectively．TheexpressionofosteocaleinnadOPGmRNAwereexamindeby semiquna · titiveRT—PCRandOPGproteinby Westernblot．Results TheHOBspurifide by enzymedigestion vitro functionednormallyasobservde invivo；OPGWaSexpressedby hteHOBsnadcouldbeupregulatde by 17 estra· diol，nadhtiseffectcouldbe blockde by ICI182780，na natagonistofestrogenreceptors．Conclusion Itiseasy topurifyplentifulHOBswihtnormalfunctionsbyenzymedigestion，nadhteexpressionofOPGinHOBsisdown— regulatde underhteconditionofestrogendeficiency． 【Keywords】 Humanosteoblast