链球菌噬菌体裂解酶在大肠杆菌中的表达纯化及活性检测.PDF

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, August 25; 25(8): 1267-1272 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 生物技术与方法 1 2 2 1 1 1 1 1 陈蔚青 , 王晓枫 , 王普 , 张德勇 , 陈虹 , 柯薇 , 陆胤 , 张建芬 1 , 310015 2 , 310032 : 噬菌体裂解酶是噬菌体产生的细胞壁水解酶, 通过水解宿主菌细胞壁使子代噬菌体释放, 在体外能高效且特 异性地杀死细菌。本研究旨在克隆和表达链球菌噬菌体裂解酶 PlyC, 并测定其生物学活性。利用 PCR 方法扩增 PlyC 的2 条肽链PlyCA 和PlyCB , 构建表达载体 pET-32a(+)-PlyCA 和 pET-32a(+)-PlyCB, 分别转化至大肠杆菌 BL21(DE3) 中, 以0.7 mmol/L IPTG 在30 oC 诱导7 h 实现了高效表达, SDS分析表明PlyCA 和PlyCB 表达量均可达菌体总蛋 白的30% 以上。采用Ni2+-NTA 亲和层析法纯化目的蛋白, 其纯度大于95% 。用透析复性方法得到目的产物重组链球菌 噬菌体裂解酶 PlyC, 以浊度法和平板计数法检测其体外抗菌效果, 扫描电子显微镜观察裂解酶作用前后细菌细胞形态 变化。结果表明重组PlyC 能特异性裂解化脓性链球菌(A 组β-溶血性链球菌), 以4 μg/mL 浓度作用于OD600 为0.56 的 菌液60 min 后杀菌率达99.6%, 扫描电镜观察结果显示该酶作用于菌体后, 链球菌细胞裂解, 呈碎片状态。本研究为开 发一种新型、高效的链球菌感染疾病治疗药物打下了基础。 : 噬菌体裂解酶, 链球菌, 表达, 纯化, 活性 Expression, purification and characterization of bacteriophage lysin of Streptococcus in Escherichia coli 1 2 2 1 1 1 1 Weiqing Chen , Xiaofeng Wang , Pu Wang , Deyong Zhang , Hong Chen , Wei Ke , Yin Lu , and Jianfen Zhang1 1 College of Biological and Environmental Engineering, Zhejiang Shuren University, Hangzhou 310015, China 2 College of Pharmaceutical Science, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310032, China