三种念珠藻中超氧化物歧化酶基因的克隆及活性的研究-水生生物学专业论文.docxVIP

汪滢；三种念珠蕞中超氧化物歧化酶基因的克隆及活性的研究摘 汪滢；三种念珠蕞中超氧化物歧化酶基因的克隆及活性的研究 摘 要 作为对生态环境非常重要和具有较高经济价值的蓝藻，也作为研究极端环境(如干 旱、严寒、高温、紫外线等)下生命现象的良好材料，念珠藻受到关注由来已久，研究 其抗逆及适应机制、寻找其生长发育的规律、实现人工培养，多年来一直是人们梦寐以 求的。本文正是在这样的背景下，从分子水平上对念珠藻进行研究，采用基因工程技术 分别克隆了不同念珠藻的超氧化物歧化酶，转入大肠杆菌中进行表达。并对表达蛋白进 行纯化，活性测定。此外，并测定和比较了不同念珠藻在不同胁迫环境下粗提超氧化物 歧化酶活性随时间的变化过程。实验主要内容和结果如下： 1)根据基因文库中公布的编码地木耳超氧化物歧化酶的基因设计引物，通过不同 念珠藻总DNA提取，PCR技术，分别获取了5个不同藻株的目的基因片段，再将目的基 因克隆到载体pUCl9上，测得序列。利用生物信息学知识，将所获序列与基因库中公布 的地木耳的超氧化物歧化酶的基因进行比较，在氨基酸和核苷酸序列上同源性最高达 lOO％。 2)利用感受态细菌进行转化，SDS—PAGE分析，首次获得了以可溶性形式表达的不 同念珠藻的超氧化物歧化酶，利用SDS分析，其大小符合Fe—SOD，利用Ni柱亲 和特性，进行不同的蛋白纯化，SDS—PAGE分析表明获得了纯化。利用NB