三氧化二砷对小鼠膀胱癌抗癌作用机制及配伍四君子汤治疗的实验研究-中西医结合临床专业论文.docxVIP

三氧化二砷对小鼠膀胱癌抗癌 三氧化二砷对小鼠膀胱癌抗癌 作用机制及配伍四君子汤治疗的实验研究 博士研究生： 李传刚 指导教师： 刘用楫教授 专业名称： 中西医结合临床 摘要 ／中医学把人体看成一个以脏腑经络为核心的有机整 ＼ 体，把人和自然界～切事物都看成是阴阳对立统一的两个 方面。认为疾病的发生、发展和转归，都是阴阳失调，邪 正斗争的过程或结果。中医在长期的医疗实践过程中，对 肿瘤的治疗逐渐形成了以扶正祛邪为主导，根据邪正虚实 情况，配伍多种中药，达到标本兼治的治疗方针。因此， 开发传统中医药用于抗肿瘤治疗，并运用现代科学的先进 手段来研究它、发展它，使它现代化，造福于人类，对于 丰富和发展祖国医学具有极其重大的意义。 现代医学研究发现，肿瘤的发生是一个多因素、多环 节、多阶段的过程，癌蓦因及抑癌基因与肿瘤形成的关系 十分密切，即癌基因的激活或抑癌基因的失活；同时，肿 瘤的发生也表现在细胞周期调控的异常，一方面，肿瘤细 胞增殖过快，另一方面，细胞凋亡受阻。近二十多年来， 特别是二十世纪九十年代，细胞凋亡成为生物学和生物医 特别是二十世纪九十年代，细胞凋亡成为生物学和生物医 学的研究热点。1 9 9 4年的《S c i e n c e》杂志将细胞凋亡 评为当年世界生命科学中仅次于D N A修复酶的第二个研 究热点。 我国学者在二十世纪七十年代开始应用A S 2 O 3治疗 A P L，并取得了良好的疗效，近年来研究证明，A S 2 O 3 可以促进肝癌、食管癌、神经母细胞瘤等原发或转移性肿 瘤细胞发生凋亡。膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿 、 瘤，具有多发性和易复发性的特点，。、为了进一步探讨 ， A S：O 3在膀胱癌治疗方面的前景，我们在祖国医学理论 指导下，在中医辨证论治的基础上，根据药物的药性， 选用A S 2 O 3配伍“四君子汤”，即A s 2 O 3作为一种剧毒 物质，是以毒攻毒治法的代表；而“四君子汤”是经典的 健脾益气、扶正固本的传统方剂，应用现代生物化学及 分子生物学技术，从分子水平阐明A S 2 O 3对小鼠膀胱移 行细胞癌细胞株w Y H 9 2 9的抗癌作用机制，及A S 2 O 3 配伍“四君’子汤”以及rh I L．6对小鼠膀胱移行细胞癌 B T T，，。荷瘤小鼠抗癌作用的机制进行研究，为其进一 步临床应用，治疗膀胱癌提供理论及实验依据。 第一部分 三氧化二砷对小鼠膀胱癌细胞株W Y H 9 2 9 细胞诱导凋亡作用机制的研究j 目的：研究A S 2 O 3对小鼠膀胱癌细胞株w Y H 9 2 9 细胞生长抑制、诱导凋亡的生物学效应及作用机制。f方 t 法：通过M T T法检测A S 2 O 3对肿瘤细胞生长的影响_ 用光镜、电镜、流式细胞仪、D N A凝胶电泳等方法检 测A S 2 O 3诱导细胞凋亡，用分光光度仪、流式细胞仪 等方法检测A 等方法检测A S 2 O 3对肿瘤细胞膜系统及死亡受体表达和 细胞内游离钙离子浓度的影响。结果：A s 2 O 3可以明显 抑制小鼠膀胱癌细胞的生长，A S 2 O 3作用肿瘤细胞后， 光镜、电镜下可见特征性凋亡细胞的出现，流式细胞仪检 测出在G 1期前出现凋亡峰，D N A凝胶电泳显示出凋亡 特征性的梯带现象。A s 2 O 3对肿瘤细胞膜系统有明显的 影响，可以降低细胞膜脂的流动性，增加肿瘤细胞L P O 的产生，增加肿瘤细胞膜死亡受体F a S、F a S L的表达 、 以及促进肿瘤细胞内游离钙离子浓度的升高秽结论： ／ A S 2 O 3能显著抑制小鼠膀胱癌细胞的生长，诱导细胞凋 亡：并通过降低细胞膜脂的流动性，促进肿瘤细胞膜中脂 质过氧化，增加死亡受体F a S及F a s L的表达，同时可 以促进肿瘤细胞内游离钙离子浓度的升高作为其信号传 导途径，从而实现诱导肿瘤细胞凋亡。 第二部分 三氧化二砷及其配伍四君子汤对BTT，3， 荷瘤小鼠抗肿瘤作用的研究 目的；探讨A s 2 O 3及其配伍四君子汤对B T T 7 3 9荷 瘤小鼠肿瘤的抗肿瘤作用。f方法：B T T 7 3 9肿瘤细胞接 种T 7 3 9小鼠，随机分为4组， ①A s 2 O 3组每日腹腔注 射A S 2 O 3注射液0．1 rP．g一次；②M M C组每日～次腹 腔给药l rn g／k g；③A s 2 O 3+四君子汤组：腹腔注射 A S 2 O 3 0．1 111 g，日一次；同时每日一次四君子汤水煎液 灌胃0．2 5 tO．1；④对照组：每目腹腔注射生理盐水注射液 0．1 ml一次。分别测定小鼠瘤重及肺转移情况，同时监 测血像，脂质过氧化物和血清S e水平的变化，以及测定 小鼠腹腔巨噬细胞活性。结果：A s 2 O 3与四君子汤联合 应照，可以提高和维