三氧化二砷对小鼠黑素瘤的抗肿瘤作用及机制研究-皮肤性病学专业论文.docxVIP

英文缩写注释AS203 英文缩写注释 AS203 arsenic trioxide 三氧化二砷 AA ascorbic acid 维生素C MC melanocyte 黑素细胞 ROS reactive oxygen species 活性氧 GSH glutathione 谷胱甘肽 Iscove’S Modified Dulbecco IMDM IMDM培养基 Medium ED-I’A ethylenedianine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 FBS fetuS bovine serum 胎牛血清 急性早幼粒细胞性白 APL acute promyelocytic leukemia 血病 MTT thiazolyblue 噻唑兰 DTIC dacarbazine 氮酰咪胺 1 2-o一十四烷酰佛波 12。。一‘e昀decanoylphorb。l一13—8。眈此酯醇一1 3～乙酯 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 PKC protein kinase C 蛋白激酶C 南京医利人学协t’学位论文三氧化二砷对黑素癌作用的实验研究 南京医利人学协t’学位论文 三氧化二砷对黑素癌作用的实验研究 博士研究生 侯麦花 导 师 朱文元 中文摘要 恶性黑素瘤在世界范围内的发病有逐年增加的趋势，其恶性程度 极高，临床缺乏有效治疗手段。目前通常采用的治疗方案包括手术切 除、生物治疗、放射治疗及化疗效果均不理想。近年来黑素瘤的化学 药物治疗没有取得突破性进展，临床化学药物治疗中最有效的药物仍 是氮酰咪z嚷x-(dacarbazine，DTIC)，显效率约20％，其余依次为卡氮介 显效率18％、甲环亚硝脲显效率16％、顺铂(cisplatin)显效率15％。 DTIC联用两种及三种药物疗效提高到24％及31％，但毒性反应显著 增加。总的来说，恶性黑素瘤仍是对现有化疗药物极不敏感的恶性肿 瘤之一。因此须寻求更为有效的化疗药物及制定联合化疗方案。 三氧化二砷是中药砒石的主要成分，传统主要用于治疗梅 毒、类风湿性关节炎、哮喘、疟疾、痢疾等病证。低剂量砷剂在 临床较为常用，其中最常用于恶性肿瘤的治疗，包括外用治疗恶性 黑素瘤等。三氧化二砷还用于治疗白癜风、花斑癣、银屑病等皮肤病。 微量三氧化二砷还有刺激造血及促进细胞增殖作用。西方曾采用含亚 砷酸的溶液活疗肿瘤，但一直未受重视。 20世纪70年代后，张亭栋等发现单用的As203注射液对急性早 幼粒细胞白血病(APL)的疗效显著，此后得到多位学者证实。1996 年陈国强、陈竺等证实三氧化二砷是通过诱导肿瘤细胞分化和凋亡而 发挥抗瘤效应，临床治疗浓度是相对安全的。近年三氧化二砷对各种 肿瘤包括实体瘤的作用及机制研究进展较快。但对黑素瘤的作用及其 机制尚未见相关报道。因此非常有越要研究三氧化二砷对黑素瘤的抗 肿瘤作用，为黑素瘤的治疗提供新的有效药物，并拓宽三氧化二砷的 疾病谱。本研究观察三氧化二砷及其联用抗氧化剂维生素c对小鼠 疾病谱。 本研究观察三氧化二砷及其联用抗氧化剂维生素c对小鼠 黑素瘤细胞增殖、凋亡、分化的影响，并在小鼠皮肤黑素瘤模 型，检测三氧化二砷对小鼠移植性肿瘤的生长、体积及瘤重影 响，探讨其治疗黑素瘤的机制。共分二部分论述： 一、三氧化二砷对小鼠黑素瘤细胞Cloudman s91的作用 分别咀不同浓度三氧化二砷作用小鼠黑素瘤Cloudman$91细 胞，显示其对黑素瘤细胞的作用随浓度高低而影响不同，高浓度时诱 导肿瘤细胞凋亡，中浓度时主要抑制肿瘤细胞生长，低浓度促进细胞 增殖细胞形态发生改变，并向成熟细胞分化。 合成黑素是黑素细胞功能的体现，$91是黑素含量极低的黑素瘤 细胞，检测低浓度三氧化二砷对黑素瘤细胞黑素含量及酪氨酸酶活性 发现，黑素瘤细胞在增殖的同时，细胞形态发生改变、黑素含量增加， 酪氨酸酶活性增强，该作用可被长时程PKC激活剂TPA所阻断。这 些结果提示黑素瘤细胞在低剂量三氧化二砷作用下可向正常黑素细 胞分化，该过程与PKC途径密切相关。 由于黑素瘤细胞对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性显著低于APL， 本研究进一步观察了联合应用维生素c对黑素瘤生长抑制及细胞凋 亡的影响，发现联周维生素C明显增强其抑制黑素瘤细胞生长，凋 亡率显著增加，三氧化二砷联合应用维生素c为临床治疗恶性黑素 瘤细胞提供了新途径。 二、三氧化二砷对黑素瘤荷瘤鼠作用的实验研究 为进一步证实三氧化二砷对黑素瘤的体内抗肿瘤作用，本研究选 择小鼠移植性肿瘤黑素瘤模型，以不同剂量三氧化二砷腹腔注射给 药，连续用药21d，以顺铂为阳性对照药，结果显示5mg／kg／d三氧 南京医科走学博J。学垃i_f=文化二砷可明显抑制黑素瘤生长，2mg／kg／d及】mg／kg／d三氧化