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PCR反应的五要素（引物、酶、dNTP、模板和Mg2+浓度） 来源： 易生物实验 浏览次数：1557 网友评论 0 条 1、引物?2、酶?3、dNTP?4、模板?5、Mg2+浓度 关键词： 引物 浓度 要素 PCR反应 酶 dNTP 模板 Mg2+浓度 1、引物?? 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡 核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板 DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：　　①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。　　②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。　　③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶 核苷酸的成串排列。　　④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。　　⑤引物3’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。　　⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。　　⑦引物的特异性：