沙尔威辛抗肿瘤转移作用及其机制研究-药理学专业论文.docx

中文摘要沙尔威辛抗肿瘤转移作用及其机制研究+ 中文摘要 沙尔威辛抗肿瘤转移作用及其机制研究+ 研究生：郎靖瑜 导师：丁健 中文摘要 沙尔威辛(Salvicine，SAL)是中国科学院上海药物研究所研发的抗肿瘤新 药，是一种新的拓扑异构酶Ij毒剂，现已进入I期临床试验。肿瘤转移是肿瘤 病人致死的最主要因素，90％临床肿瘤病人死亡是由肿瘤转移所引起的。本研 究首先发现和确证了SAL具有明显的体内抗转移作用。在人乳腺癌 MDA—MB-435裸小鼠原位移植瘤模型中，6mg／kg、12mg／kg和24mg／kg剂量 下，静脉给药每周一次，肺转移抑制率分别为33．O％、54．O％和81．6％，而原 位肿瘤没有明显的生长抑制(p0．05)。比较阳性药依托泊甙和阿霉素抗转移效 果后，发现SAL抗转移作用可能具有独特的分子机制，与其体内细胞毒机制无 关。采用cDNA基因芯片技术检测SAL作用后原位瘤和转移灶组织中基因表达 谱的变化，结果表明与对照组相比SAL给药后原位灶、转移灶组织中纤维粘连 蛋白，整合素，RhoC等细胞粘附、细胞运动相关基因mRNA的表达水平明显 下调，而VEGF、VEGFR、MMP2、MMP9等细胞外机制降解、新生血管生成 类基因mRNA的表达无显著差异；进一步结合具体基因和信号传导通路分析， 发现Integrin—Rho信号传导途径在SAL抗肿瘤转移过程中起了十分重要作用。 RT-PCR、免疫印迹方法检测发现SAL能时间和剂量依赖性地抑制 MDA—MB_435细胞株中RhoC mRNA和蛋白质水平的表达，而对RhoA、Racl 和cdc42的作用不明显。细胞免疫染色结果显示，SAL能明显抑制由Rho诱导 的应力纤维生成，并且能抑制LFlA(Rho特异性激动剂)刺激下应力纤维的形成， 与阳性药c3 exoenzyme和Y27632结果一致。SAL还能明显抑制由LPA激发 的人乳腺癌MDA．MB-435细胞体外侵袭能力， SAL 5 pM、10 pM、20 pM作 V 沙尔威辛抗肿瘤转移作用及其机制研究用20小时后细胞迁移抑制率分别为50％、85％、100％，强于阳性对照药 沙尔威辛抗肿瘤转移作用及其机制研究 用20小时后细胞迁移抑制率分别为50％、85％、100％，强于阳性对照药 Y-27632(Rho激酶抑制剂)。此外，SAL可以显著抑制LPA刺激下RhoA和RhoC 的细胞膜转位活性，7．5 pM作用16小时能达到50％抑制率，20 uM作用1 6 小时达到100％抑制率。这些结果说明，SAL对Rho依赖的信号转导通路—— Integrin．Rho和LPA．Rho——的抑制是其体内抗转移作用的核心机制。最后， 通过体内筛选我们建立了高转移能力的子本细胞株，并发现在子本高转移细胞 株中其运动能力得到了极大的增强，说明细胞运动能力的改变是肿瘤转移过程 中的一个基本事件，通过Rho抑制细胞运动将是有效的抗肿瘤转移的策略和靶 点。 关键词：沙尔威辛；肿瘤转移；细胞运动；Rho；MDA-MB一435细胞；原位接 种：裸小鼠移植瘤。 8本研究工作获得以下资助：中国国家自然科学基金委员会资助项目，编号中国科技部资助项目，编号2002AA223461。 VI —— —— 蔓塞塑墨 Salvicine inhibited pulmonary metastasis of MDA-MB-435 orthotopic xenografts in nude mice by repression of cell motility via Rho’ Lang Jing-Yu(Pharmacology) Directed by Professor Ding Jian Metastasis is a major cause of death in cancer patients，and involves a series of complex process including loss of adhesion，proteolysis，cell motility and angiogenesis．Salvicine is a structurally modified drivative of a natural product lead from Chinese traditional herb Salvia prionitis Hance．and has potent anti—cancer activity／n vitro and／n vivo．It is a novel DNA topoisomerase II inhibitor which is currently in clinical trial phase