硫化氢对腹主动脉结扎大鼠心肌肥厚、纤维化的作用研究-心血管内科专业论文.docxVIP

汕头大学硕士研究生学位论文 汕头大学硕士研究生学位论文 I I 中文摘要 背景及目的：硫化氢（hydrogen sulfide, H2S）是继一氧化氮(nitrogen monoxidum, NO) 和一氧化碳(carbon oxide, CO)之后最近发现的第三号内源性气体信号分子，对体内多种病 理生理过程发挥重要的调节作用。尤其在心血管系统，H2S具有特定的生理调节作用。心 肌肥厚是心血管系统常见病变，也是心功能恶化及心源性猝死的独立危险因素，因而心肌 肥厚的消退，能有效的降低心血管疾病的发病率及死亡率。研究证实，肾素-血管紧张素系 统(renin-angiotensin system, RAS)在心肌肥厚发生发展中起着重要作用。为此，本实验通过 部分结扎大鼠腹主动脉，建立心肌肥厚模型，进而观察在H2S干预下，心肌肥厚、纤维化 的情况，心肌、循环中血管紧张素 - Ⅱ (Ang- Ⅱ ) 表达的变化以及心肌缝隙连接蛋白 43(Connexin 43, Cx43)含量的变化，从而探讨H2S能否改善压力超负荷诱导的心肌肥厚、纤 维化，以及相关机制。 材料及方法：实验动物为 Sprague-Dawley 8 周龄雄性大鼠(170-190 g)，随机分为正常 对照组(n=10)，假手术组(n=10)和模型组(n=80)，模型组大鼠按文献报道行腹主动脉结扎， 1 周后，存活大鼠随机分为单纯结扎组(n=14)，结扎+依那普利组(n=14)(依那普利胃饲给药， 5mg/kg/d)，结扎+硫化氢组(n=14)(硫化氢腹腔注射给药，14umol/kg/d)。假手术组只分离腹 主动脉，不结扎，其他处理同模型组。大鼠结扎后 1 周，每天清晨给药，喂养四周后处死。 分别取腹主动脉血及大鼠心肌做以下检测： 1.通过左室质量指数(LVW/BW)的检测，判断心肌肥厚的情况； 2.通过苏木素-伊红染色，检测心肌细胞最短径及横断面面积，判断心肌细胞肥大情况； 3.通过天狼星红染色，从形态学上观察心肌胶原沉积程度及胶原容积分数；通过碱水解法 检测心肌羟脯氨酸的含量，确定各组心肌胶原的含量。 4.通过酶联免疫吸附实验，检测血浆及心肌组织中血管紧张素-Ⅱ的含量。 5.通过免疫组织化学方法，检测心肌缝隙连接蛋白 43 表达情况。 6.通过亚甲基蓝分光光度法，测定内源性H2S的含量。 结果：1、与假手术组相比，单纯结扎组大鼠左心室重量及左室质量指数升高分别达 35.26%(P0.05)、25%(P0.05)；较单纯结扎组，依那普利(5mg/kg/d)组左心室重量及左室 质量指数各下降了23.4%(P0.05)、6.38%(P0.05)。硫氢化钠(14umol/kg/d，硫化氢的供体) 腹腔注射4周后，左心室重量及左室质量指数各下降了14.9%(P0.05)、4.49%(P0.05)。 II II 2、较假手术组，模型组大鼠心肌细胞横断面面积增大了 94.59% (P0.01)。较单纯结扎组， 依那普利组心肌细胞横断面面积减小了 25.48%(P0.05)。同时，硫氢化钠腹腔注射 4 周， 心肌细胞面积减小了 15.97%(P0.05)。 3、较假手术组，模型组大鼠胶原容积分数增加了 60%(P0.05)，心肌羟脯氨酸含量增加了 58%(P0.05)。给予依那普利及硫化氢喂养 4 周后，较单纯结扎组，左心室心内膜、心外膜 下心肌胶原密度明显降低，胶原容积分数分别减少了 24%(P0.05)、17.9%(P0.05)，心肌 羟脯氨酸含量分别减少了 31.4%(P0.05)、39.1%(P0.05)。 4、单纯结扎组心肌 Ang-Ⅱ的表达较假手术组升高了 29.3% (P0.05)；依那普利组较单纯 结扎组含量降低了 12.28%(P0.05)，硫化氢组较单纯结扎组含量降低了 17.47%(P0.05)， 而血浆 Ang-Ⅱ表达在各组间无明显差异(P0.05)。 5、单纯结扎组大鼠心肌缝隙连接蛋白 43 的表达明显下降；而依那普利组及硫化氢组较单 纯结扎组明显改善。 6、腹主动脉结扎术后 5 周，较假手术组，内源性H2S含量下降了 7.65%(P0.05)。较单纯 结扎组，依那普利组内源性H2S含量升高了 4.27%(P0.05)；同时，给予NaHS喂养 4 周， 内源性H2S含量升高了 3.65%(P0.05)。 结论：1、腹主动脉结扎大鼠左室明显肥厚，纤维化程度明显升高，依那普利(5mg/kg/d) 及硫化氢(14umol/kg/d)明显减弱左室肥厚，降低了心肌纤维化。2、腹主动脉结扎大鼠缝隙 连接蛋白 43 表达量下降，依那普利及硫化氢能改善 Cx43 的表达。3、腹主动脉结扎大鼠 心肌局部肾素-血管紧张素系统(RAS)激活，心肌 Ang-Ⅱ的表达增加；而依那普利及硫